大黄对内毒素刺激的巨噬细胞分泌和细胞[Ca~(2+)]_i的抑制作用

一、大黄对内毒素刺激巨噬细胞分泌和细胞[Ca~(2+)]_i的抑制作用特征（论文文献综述）

刘云^[1]（2021）在《NAFLD中医组方规律分析和中医证候特征调查及葱白提取物治疗NAFLD大鼠的机制研究》文中提出本篇文章通过文献分析研究、临床调查研究、网络药理学研究及动物实验研究四部分探讨了中医药对非酒精性脂肪性肝病的认知。1基于中医传承辅助系统的中医药治疗非酒精性脂肪性肝病组方规律分析目的:运用“中医传承辅助平台系统”软件分析近十年文献报道的治疗非酒精性脂肪性肝病的中药组方规律。方法:通过收集CNKI及万方中运用中医药方剂治疗非酒精性脂肪性肝病的文献,筛选并建立方剂数据库,利用关联规则、聚类分析等数据挖掘方法,得出治疗非酒精性脂肪性肝病的辨证用药规律及核心药物。结果:共纳入病例处方320份,涉及中药216味,主要证型6种,常见治法9种,总结出药物使用频次,四气五味,归经及药物的关联及配伍。结论:通过数据挖掘对非酒精性脂肪性肝病的方剂进行相关分析,得出组方以祛痰散结、活血化瘀为主,并进一步总结组方规律,为临床诊疗提供一定参考。2非酒精性脂肪性肝病中医证候特征调查目的:通过收集临床数据探讨非酒精性脂肪肝病中医证型、症状分布规律与特征。方法:以98例NAFLD患者为研究对象,以中医辨证及相关指南意见为基础将纳入患者辨证分型,并采集每位患者症状表现、一般情况、临床检查指标、量表评分等,从而总结探讨各中医证型与客观化指标的关系。结果:在98例NAFLD患者中,男性发病率高于女性;男女发病率均趋于年轻化;血脂异常升高（40.8%）、高血压（41.8%）、糖耐量异常（31.6%）是最常见危险因素;肝郁脾虚证31例、湿热内蕴证28例、痰湿内阻证19例、痰瘀互结证13例、脾肾两虚证7例。出现次数最多的10种症状为四肢乏力（66）、胁肋胀满（61）、食欲不振（54）、脘腹痞闷（48）、大便不爽（36）、口干（31）、入睡困难（31）、恶心欲呕（30）、口腻（29）、胁痛（28）;肝郁脾虚证、痰湿内阻证与其他证型相比ALT升高;痰瘀互结证甘油三酯、总胆固醇水平最高;湿热内蕴证空腹血糖水高于其他证型;在PRO量表评分方面,痰瘀互结证在生理领域评分最高,肝郁脾虚证在心理领域评分最高,痰瘀互结证总得分最高。结论:NAFLD男性发病率高,且趋于年轻化;血脂异常升高、高血压、糖耐量异常是最常见危险因素;肝郁脾虚证是各证型中最常见证型;四肢乏力、胁肋胀满、食欲不振、脘腹痞闷等为常见症状;不同证型的ALT、甘油三酯、总胆固醇、空腹血糖和PRO量表评分具有差异,但这些差异需进一步扩大样本量来进行验证。3基于网络药理学的葱白提取物治疗非酒精性脂肪肝病的机制研究目的:应用网络药理学的研究方法分析葱白提取物治疗非酒精性脂肪性肝病的潜在作用靶点。方法:通过中药系统药理分析平台检索葱白有效成分及作用靶点,再利用Gene Cards网络数据库搜索NAFLD关键靶点,运用Perl语言软件对数据进行预处理,再通过R语言软件、Cytoscape软件以及String网络数据平台进行数据分析及作图。结果:葱白提取物的β-谷甾醇和NAFLD共同基因靶点有17个;通过GO功能富集分析发现共同基因靶点的功能涉及核受体活性、转录因子活性;KEGG通路富集分析显示共同基因靶点涉及流体剪切应力和动脉粥样硬化信号通路、TNF信号通路、细胞凋亡信号通路、IL-17信号通路、糖尿病并发症信号通路、脂肪因子信号通路、胰岛素抵抗信号通路、NF-κB信号通路等。结论:根据网络药理学分析结果及查阅相关文献,预测PPARγ可作为葱白提取物治疗NAFLD的重要作用靶点。4基于PPARγ探讨葱白提取物改善NAFLD大鼠胰岛素抵抗及巨噬细胞极化的实验研究目的:探讨葱白提取物改善NAFLD大鼠胰岛素抵抗及巨噬细胞极化的机制。方法:将36只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组、葱白加抑制剂组、吡格列酮组、抑制剂组,除正常组外,均采用高脂饮食造模12周,实验结束称取大鼠体重及肝脏湿重;采集血清标本检测TC、TG、AST、ALT、FBG、FINS、HOMA-IR水平;采集骨骼肌标本,进行HE染色,运用免疫荧光染色检测Glut4、CD68蛋白表达;运用Western blot法检测IRS-1、PI3K、Glut4蛋白表达;运用荧光定量PCR法检测基因F4/80、i NOS、TNFα、Arg-1、IL-10表达。采集大鼠肝脏组织,用以HE和油红O染色;运用免疫荧光染色检测CD68、CD163、TNFα、IL-10、TLR4、My D88蛋白表达;运用Western blot法检测PPARγ、CD68、TLR4、NFκB、My D88蛋白表达;运用荧光定量PCR法检测基因IRS-1、IRS-2、SREBP-1c、PEPCK、G6Pase、F4/80、MCP-1、i NOS、Arg-1、TNFα、IL-10表达。结果:葱白提取物和吡格列酮能控制NAFLD体重,降低TC、TG、AST、ALT、FBG、FINS、HOMA-IR水平;增加骨骼肌Glut4、CD68免疫荧光强度;上调骨骼肌IRS-1、PI3K、Glut4蛋白表达;上调骨骼肌基因Arg-1、IL-10表达,下调基因F4/80、i NOS、TNFα表达;减弱肝组织中CD68、TNFα、TLR4、My D88蛋白荧光强度,并增加CD163、IL-10蛋白荧光强度;上调肝组织PPARγ蛋白表达,下调CD68、TLR4、NFκB、My D88蛋白表达;上调肝组织基因Arg-1、IL-10、IRS-2表达,下调基因IRS-1、SREBP-1c、PEPCK、G6Pase、F4/80、MCP-1、i NOS、TNFα表达。葱白加抑制剂组和模型组在上述各指标检测结果上未见统计学差异。结论:葱白提取物可改善NAFLD胰岛素抵抗,诱导巨噬细胞由M1型向M2型转化,从而减轻免疫炎性反应。同时PPARγ是葱白提取物发挥治疗作用的重要分子靶点之一。

朱长乐^[2]（2020）在《清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究》文中进行了进一步梳理本论文分为综述和实验研究两部分综述综述一对中药复方及中药单体治疗急性肺损伤的国内外相关文献进行了综述。综述二对急性肺损伤的病因、临床表现等相关文献进行了综述,并对急性肺损伤的发病机制进行了重点综述。实验研究实验研究分为两部分,第一部分主要研究了清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用,分为四个实验;第二部分主要研究了黄芩苷对急性肺损伤的干预作用,分为五个实验。第一部分:清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用实验一目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:气道滴注LPS可显着上调大鼠肺重量的湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,增加肺泡毛细血管膜通透性,促进炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的释放,诱导中性粒细胞的聚集浸润,引起肺泡壁增厚、支气管上皮细胞水肿。清金化痰汤可显着降低肺重量湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,减轻ALI大鼠的肺泡毛细血管膜通透性,减少蛋白质由毛细血管、间质向肺泡的渗透,减少中性粒细胞聚集,抑制炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验二目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:气道滴注LPS可显着促进TLR4、MYD88、NLRP3的蛋白表达的升高和NF-κB磷酸化。清金化痰汤可显着降低TLR4、MYD88、NLRP3蛋白的表达,抑制了 NF-κB的磷酸化,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验三目的:探索清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响。方法:使用冻干机将含药血清冻干为含药血清冻干粉。以空白含药血清冻干粉、清金化痰汤含药血清冻干粉、克拉霉素含药血清冻干粉干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:清金化痰汤含药血清冻干粉和克拉霉素含药血清冻干粉可以引起细胞明显的水肿,细胞内可见黑色颗粒物质,并且无明显抑制炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO分泌的作用,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验四目的:分析中药复方清金化痰汤的主要化学成分及入血成分。方法:大鼠灌胃纯水、清金化痰汤和克拉霉素7天后采血、离心,制备含药血清。采用液质联用技术检测并分析各药物及其含药血清的主要化学成分。结果:清金化痰汤中含有9个化学成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、绿原酸、咖啡酸、芦丁、连翘苷、大黄酸、甘草酸铵、齐墩果酸,其中3个为入血成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、甘草酸铵。第二部分:黄芩苷对急性肺损伤的干预作用实验五目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:黄芩苷标准品浓度在10μg/ml及以下时,对细胞存活率无明显影响,细胞生长状态较好,细胞扁平,呈多边形。黄芩苷用药对炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO的表达有一定的抑制作用。实验六目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响。方法:以黄岑苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞培养上清中的炎症因子的含量、观察细胞形态、用Transwell小室检测上皮细胞趋化中性粒细胞的作用。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可显着促进细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF的分泌,刺激支气管上皮细胞趋化中性粒细胞,诱导上皮细胞损伤。黄芩苷可显着地抑制IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF等炎症因子的分泌,减少中性粒细胞的迁移数量。实验七目的:探索黄芩苷对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞中TLR4、MYD88、TRIF、NF-κB、NLRP3蛋白含量及mRNA表达情况。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可激活TLR4信号通路,显着上调TLR4、MyD88、NLRP3蛋白的表达和NF-κB的磷酸化,黄芩苷可显着地下调TLR4、MyD88、p-NF-κB和NLRP3蛋白含量和mRNA的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验八目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:LPS干预上调了 BALF和血清中的炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,增加了肺泡毛细血管膜通透性。黄芩苷干预可显着降低大鼠肺组织重量的湿/干比和BALF的蛋白质浓度,抑制大量中性粒细胞浸润到肺泡间质和肺泡间隙,减轻支气管上皮细胞的水肿,抑制上皮细胞的黏液分泌,抑制BALF和血清中炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验九目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:LPS干预促进TLR4信号通路和MAPK信号通路的激活。黄芩苷可以显着地抑制TLR4、MYD88、P-NF-κB、NLRP3、P-ERK和P-p38蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.气道滴注5mg/kg的LPS溶液可诱导大鼠的肺泡毛细血管通透性增加、炎症因子分泌增加、肺组织病理变化,符合急性肺损伤的病理改变,可以用于急性肺损伤的实验研究。2.清金化痰汤能够通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活,抑制炎症因子分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加和大鼠的急性肺损伤。3.清金化痰汤的主要化学成分之一黄芩苷可显着抑制LPS诱导BEAS-2B细胞的损伤以及炎症因子的分泌。4.黄芩苷可以抑制LPS诱导的急性大鼠肺损伤模型炎症因子的分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加、肺水肿和大鼠的急性肺损伤。5.黄芩苷可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活与转录,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症风暴的爆发。6.黄芩苷能够通过抑制MAPK信号通路的激活,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症反应的扩大。

李丝雨^[3]（2020）在《基于“靶点预测—自噬凋亡”的祖卡木颗粒及其药味组合对AM作用研究》文中进行了进一步梳理研究背景:祖卡木颗粒是《国家基本药物目录（2018版）》、《国家急（抢）救药品直接挂网采购示范药品目录》收载的维药重点品种,是非常具代表性维成药之一。作为维医药理论中治疗感冒的首选药物,具有独特的抗炎及止咳药效,临床研究表明其疗效确切,安全可靠,但目前应用科学方法阐释其组方抗炎机制的实验设计相对不足。本研究在国家自然科学基金（81860803）资助下,融合中医学语言进行功能表述与组方药物分类,借鉴现代医学生物指标表征作用靶点,将有利于提高祖卡木颗粒的理论价值和临床价值。目的:依据网络药理学预测得到的祖卡木颗粒抗炎活性的潜在作用靶点与机制,观察祖卡木颗粒及其组方中不同功效药物组合对AM细胞吞噬强度、细胞数量、Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）/髓样分化因子（Myeloid differentiation factor 88,MyD88）/核因子-κB（Nuclear factor kappa-B,NF-κB）信号通路以及细胞凋亡的差异性影响,分析并验证祖卡木颗粒组方中不同功效药物组合抗炎机制的差异性。方法:（1）祖卡木颗粒抗炎活性潜在作用机制预测:①利用中药系统药理学数据库与分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP）与各大期刊网站开源数据库,检索并筛选祖卡木颗粒潜在的有效化学成分,依托TCMSP、Stitch等平台筛选并预测上述有效化学成分的潜在作用靶点,构建祖卡木颗粒“有效活性成分-潜在作用靶点”数据集;②利用Genecards数据库检索炎症相关潜在作用靶点,汇总与祖卡木颗粒的共有靶点导入String数据库中,构建祖卡木颗粒“潜在作用靶点-炎症”蛋白质相互作用网络图并进行通路分析与功能富集分析,预测祖卡木颗粒抗炎活性的潜在作用靶点与机制;③基于上述实验结果,进一步分析祖卡木颗粒组方中疏散风热、止咳化痰、益胃润肺3组不同功效药物组合抗炎作用机制的差异性。（2）祖卡木颗粒抗炎活性与作用靶点验证:以博莱霉素所致大鼠肺纤维化为病理模型,以AM吞噬作用为切入点,研究祖卡木颗粒IPF大鼠不同时间节点的干预作用。①机体病理状态方面,考察祖卡木颗粒对大鼠体重、体温、呼吸频率、肺组织病理情况及羟脯氨酸含量的差异性影响,验证其抗炎活性;②药效作用靶点方面,以祖卡木颗粒对AM吞噬强度的影响为切入点,研究AM细胞数量、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及细胞凋亡、自噬程序的平衡关系对其的干预情况,在一定程度上验证预测得到的祖卡木颗粒抗炎活性作用靶点与相关通路机制;③分析并验证祖卡木颗粒组方中疏散风热、止咳化痰、益胃润肺3组不同功效药物组合对IPF作用的差异性。结果:（1）祖卡木颗粒抗炎活性潜在作用机制预测:①结合数据库筛选与文献资源补充,剔除多味药物共有成分后得到祖卡木颗粒有效活性成分165个;综合利用TCMSP、Stitch等网络药理学平台,剔除多类活性成分共有靶点后得到祖卡木颗粒潜在作用靶点235个;②利用Genecards数据库检索炎症相关潜在作用靶点695个,与祖卡木颗粒的共有潜在作用靶点为89个;使用String数据库对共有靶点进行“潜在作用靶点-炎症”蛋白质相互作用分析、通路分析与功能富集分析,初步证实祖卡木颗粒抗炎活性的作用机制可能与Toll样受体信号通路及细胞增殖相关,并涉及细胞吞噬、细胞凋亡、细胞自噬等细胞程序,为后续生物学效应验证试验的指标选择奠定基础;③祖卡木颗粒组方中3组不同功效药物组合的抗炎机制比较分析结果显示,疏散风热组药物的抗炎作用与低氧诱导因子-1（hypoxiainducible factor-1,HIF-1）信号通路可能相关,益胃润肺组药物的抗炎作用可能与Toll样受体信号通路相关,且3组药物多数抗炎信号通路下游可能与细胞凋亡相关联。（2）祖卡木颗粒抗炎活性与作用靶点验证:①抗炎活性验证试验表明,在给药第3天时,表里双治组大鼠体温显着降低（P<0.01）,疏散风热组大鼠呼吸频率显着降低（P<0.01）,2组大鼠肺组织羟脯氨酸含量与模型组相比有统计学差异（P<0.05）;在给药第14天时,祖卡木组肺组织羟脯氨酸含量显着降低（P<0.01）;在给药第28天时,表里双治组大鼠体重与模型组相比具有显着性差异（P<0.01）,益胃润肺组羟脯氨酸含量降低,差异有统计学意义（P<0.05）。肺组织病理切片HE染色结果同样表明祖卡木颗粒复方及其不同药物组合均可在一定程度上起到控制炎症浸润与纤维化进展的治疗作用。②抗炎作用靶点验证实验表明,对于AM细胞吞噬强度,给药第3天时,祖卡木组与其所含不同药物组合均较模型组有显着提高（P<0.01）;给药14天时,5组受试药物组较模型组提高,且差异具有统计学意义（P<0.05）。对于AM细胞数量,在给药第3天时,表里双治组与模型组相比具有统计学差异（P<0.05）,疏散风热组、止咳化痰组与益胃润肺组AM细胞数目显着低于模型组（P<0.01）;给药第14、28天时,5组受试药物大鼠AM细胞相对数目均低于模型组（P<0.05）。对于TLR4/MyD88/NF-κB表面受体信号通路,给药第3、7天时,5组受试药物组TLR4、MyD88 mRNA表达量较模型组显着降低（P<0.01）;给药第3天时,祖卡木组、止咳化痰组与益胃润肺组NF-κB mRNA表达量较模型组降低（P<0.05）,给药第7天时,祖卡木组、疏散风热组、益胃润肺组与表里双治组的表达量较模型组低（P<0.05）。对于细胞凋亡、自噬程序的平衡关系,结果显示祖卡木颗粒及其不同药物组合均能显着降低肺泡巨噬细胞的凋亡率（P<0.01）,其作用机制可能与干预关联蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）与自噬蛋白Beclin1结合、抑制凋亡蛋白Caspase3的激活相关;③深入对比分析祖卡木颗粒组方中不同功效药物组合对IPF作用的差异性,结果显示疏散风热组药物对于细胞凋亡及其与细胞自噬的平衡关系调节作用较为显着（P<0.01）,益胃润肺组药物对于Toll样受体信号通路的调节作用较为突出（P<0.05）,同时三组药物均可以对AM细胞的吞噬与增殖、促炎因子的转录与分泌起到较好的调节作用,与网络药理学预测结果相符。结论:整合传统与现代的多学科研究方法,可成功预测并验证祖卡木颗粒及其组方中不同功效药物组合的抗炎活性潜在作用机制。同时,以AM的吞噬强度为线索,可实现对AM细胞数量、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及细胞凋亡、自噬程序的平衡关系等祖卡木颗粒相关抗炎活性机制的研究与探讨。疏散风热组药物对于细胞凋亡及其与细胞自噬的平衡关系调节作用较为突出,益胃润肺组药物对于Toll样受体信号通路的调节作用较为显着,提示不同功效药物组合可能存在不同的抗炎机制与靶点,还需进一步深入探讨。

周红玲^[4]（2020）在《基于斑马鱼模型的中药抗内毒素活性筛选及甘草苷抑制LPS诱导急性肺损伤作用机制研究》文中认为背景与目的内毒素是一种危及人类健康乃至生命的病原菌模式分子,内毒素炎症与人类许多疾病密切相关。中药在抗内毒素损伤中表现出一定的优势和特色,中药抗内毒素活性筛选成为研究的热点。本课题组成功构建了斑马鱼内毒素炎症模型,基于此模型评价了不同层次中药（凉膈散复方及其不同提取部位,单味中药甘草及其不同提取部位、单体甘草苷）的抗内毒素活性,探索了斑马鱼浸泡给药方式对于中药抗内毒素筛选的广泛适用性,并且深入研究了凉膈散中活性成分甘草苷抗急性肺损伤（ALI）的作用机制。方法与结果1.采用LPS显微注射卵黄囊构建斑马鱼炎症模型,并浸泡给予凉膈散。生存分析结果发现凉膈散提高斑马鱼生存率;H&E染色结果表明凉膈散降低卵黄囊炎症细胞的浸润;q-PCR结果表明凉膈散抑制促炎因子TNF-α和IL-6的mRNA表达。荧光拍照、苏丹黑（SB）染色及中性红（NR）染色结果说明凉膈散可抑制中性粒细胞和巨噬细胞向炎症部位的聚集。上述结果说明斑马鱼浸泡给药方式的有效性。2.基于斑马鱼炎症模型评价凉膈散、甘草不同极性提取物、甘草苷的抗炎活性。结果发现凉膈散水提部位、甘草乙酸乙酯部位及单体甘草苷可显着提高斑马鱼生存率,抑制炎性细胞的聚集。3.采用MTT法筛选了甘草苷对于RAW264.7细胞的无毒剂量。采用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,ELISA结果表明甘草苷剂量依赖性地降低促炎因子TNF-α和IL-6的水平。进一步采用Western blotting检测甘草苷对MAPK通路的影响,结果显示甘草苷抑制JNK在Thr183/Tyr185位点的磷酸化,但对p38在Thr180/Tyr182位点和ERK在Thr202/Tyr204位点的磷酸化无明显影响。此外,甘草苷增加Nur77的表达,降低p-Nur77（Ser351）的水平,抑制c-Jun及p-c-Jun（Ser63）的表达。JNK的特异性抑制剂SP600125和JNK siRNA可协同甘草苷调控Nur77/c-Jun信号通路,而JNK特异性激动剂Anisomycin可拮抗甘草苷的调控作用。过表达JNK后采用双荧光素酶报告基因（Luciferase）检测Nur77的启动子活性,结果发现JNK过表达可抑制Nur77的启动子活性,而甘草苷可拮抗JNK的效果。EMSA及Western blotting结果显示甘草苷通过上调Nur77抑制c-Jun、p-c-Jun（Ser63）及其DNA结合活性。肺组织H&E染色表明甘草苷对LPS诱导ALI具有保护作用,同时甘草苷可降低肺水含量及肺泡灌洗液（BALF）中的蛋白含量,降低BALF中TNF-α和IL-6的水平。采用Western blotting检测肺组织蛋白,结果表明甘草苷能够调控JNK/Nur77/c-Jun通路抑制LPS诱导的ALI。JNK激动剂Anisomycin可拮抗甘草苷对ALI的上述保护作用。结论本研究①斑马鱼浸泡给药方式适用于中药抗内毒素筛选;②明确了不同层次中药（复方、单味药、单体成分）的抗内毒素活性;③阐明了甘草苷通过调控JNK/Nur77/c-Jun信号通路抑制LPS诱导的ALI。

韩雄哲^[5]（2019）在《猴腿蹄盖蕨提取物体内外抗炎作用研究》文中研究指明蕨类植物在中草药领域应用广泛。一段时期以来,全球各地对新药的开发工作越来越得到众人的重视,对药用蕨类植物更是青睐有加。在众多的蕨类植物中,猴腿蹄盖蕨作为生长在长白山地区的中草药,是能够同时满足药用和食用两方面需求的重要蕨类植物。相关研究显示,该种药用蕨类植物能够起到抗氧化以及抑制细菌增长等作用,然而国内外尚无有关蕨类植物-猴腿蹄盖蕨抗炎作用及其机制的系统研究。本文为探讨猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS刺激诱导的小鼠肺损伤的抗炎功效和对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞的影响,借助信号转导通路平台,探析其对相关的关键蛋白分子以及炎性因子蛋白表达的作用,研究猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对小鼠体内外抗炎作用,对猴腿蹄盖蕨的抗炎免疫功效给出科学合理的解释,为猴腿蹄盖蕨的开发与利用提供可靠的理论参考。本文采用MTT方法,深入分析猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对小鼠腹腔巨噬细胞的毒害影响;借助ELISA方法,探讨猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS引发的TNF-α以及IL-6分泌情况的作用;结合Western blot方法,研究炎症信号通路中相关的关键蛋白分子的影响。通过仔细的研究发现:当猴腿蹄盖蕨乙醇提取物的浓度处于0-200.0μg/mL的水平时,其不会毒害到小鼠腹腔的巨噬细胞;同时明显阻碍了TNF-α和IL-6的分泌;此外,猴腿蹄盖蕨乙醇提取物能够以有效调节炎症信号通路的方式起到抗炎的功效。另外,还探讨了猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS刺激诱导的炎症通路的影响以及对小鼠急性肺损伤模型的保护功能。在实验过程中,笔者设置了空白对照、LPS诱导、猴腿蹄盖蕨（5.0 mg/kg体重、10.0 mg/kg体重）+LPS以及地塞米松（7.8 mg/kg体重）+LPS等多组实验。将猴腿蹄盖蕨乙醇提取物通过小鼠胃部注入小鼠体内,并连续注药8天,在LPS开始诱导的两个小时前将地塞米松通过小鼠腹腔注入小鼠体内。之后再拿出小鼠肺脏,形成肺泡灌洗液,并对该灌洗液中的炎性细胞的具体数量进行监测;采取Griess方法,检测炎症介质NO的水平;结合ELISA方法,检测TNF-α、IL-1β以及IL-6的水平,做好病理切片以研究其中的组织病变情况。分析得到,猴腿蹄盖蕨乙醇提取物能够大幅度减少小鼠肺泡灌洗液内炎性细胞的含量,抑制NO、TNF-α、IL-1β以及IL-6等的产生。结果提示,猴腿蹄盖蕨乙醇提取物对LPS诱导下的小鼠急性肺损伤模型起到了显着的抗炎功效。实验进一步观察了部分猴腿蹄盖蕨萃取物对小鼠腹腔巨噬细胞抗氧化能力的实验。在作者所萃取的三种物质中,石油醚层与二氯甲烷层清除DPPH、ABTS效果最好,石油醚层在0.2 mg/mL清除DPPH效果达到了 87.33%,在0.2 mg/mL时,清除ABTS效果达到98.73%,乙酸乙酯层铁离子螯合能力最佳,乙酸乙酯在10 mg/mL时,螯合能力达到75%。通过研究得出如下结论:1.猴腿蹄盖蕨提取物可能通过MyD88和TRIF双通路以及抑制炎症因子的产生,抵抗LPS对小鼠的致炎作用;2.猴腿蹄盖蕨乙酸乙酯萃取层的抗一氧化氮能力最佳,石油醚与二氯甲烷萃取层清除DPPH、ABTS效果最好,乙酸乙酯萃取层铁离子螯合能力最佳。

董伟^[6]（2019）在《大黄调控mTOR/HIF-1a/VEGF信号通路治疗急性肺损伤的机制研究》文中指出目的:基于mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路探讨大黄治疗内毒素急性肺损伤的机制。方法:（1）建立内毒素急性肺损伤大鼠模型,观察大黄对模型肺组织病理形态和支气管肺泡灌洗液中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量的影响。（2）建立内毒素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,研究大黄对TNF-α、IL-1β、IL-6含量和mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响。结果:（1）体内实验结果HE染色光镜下观察肺组织病理结构:模型组肺组织内可见局部肺出血,肺血管内白细胞数显着增多,肺间质水肿、炎细胞浸润;大黄低剂量组和大黄高剂量组的肺组织病理改变均有减轻。与正常组相比,模型组支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显升高（P<0.05）;与模型组相比,大黄低剂量组中TNF-α含量明显降低（P<0.01）,大黄高剂量组IL-6含量明显降低（P<0.05）。（2）体外实验结果与正常组相比,模型组TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,大黄组（200 ug/ml）中TNF-α含量明显降低（P<0.05）,大黄组（800 ug/ml）中IL-6、IL-1β含量明显降低（P<0.05或P<0.01）。与正常组相比,模型组HIF-1a m RNA、e IF4E m RNA、p70S6K1 m RNA表达显着升高（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,大黄组（200ug/ml）HIF-1a m RNA、p70S6K1 m RNA、e IF4E m RNA表达显着降低（P<0.01）;大黄组（400ug/ml）HIF-1a m RNA、p70S6K1 m RNA表达显着降低（P<0.01）;大黄组（800ug/ml）HIF-1a m RNA、p70S6K1 m RNA、e IF4E m RNA表达显着降低（P<0.01）。与正常组相比,模型组HIF-1a、VEGF蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组相比,大黄组（200ug/ml）VEGF蛋白表达明显降低（P<0.05）,大黄组（400ug/ml）VEGF蛋白表达明显降低（P<0.01）,大黄组（800ug/ml）HIF-1a、VEGF蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论:（1）内毒素大鼠急性肺损伤的发病机制可能与TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高有关;（2）大黄减轻内毒素急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤,同时降低内毒素急性肺损伤大鼠支气管肺泡灌洗液TNF-α、IL-6表达水平。大黄可以保护内毒素急性肺损伤大鼠的肺组织,其机理可能与大黄能够降低内毒素急性肺损伤大鼠TNF-α、IL-6的含量有关;（3）大黄下调内毒素诱导细胞RAW264.7炎性模型的炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表达水平;且能下调HIF-1α、e IF4E、p70S6K1 m RNA以及HIF-1α、VEGF蛋白表达;大黄下调内毒素诱导鼠RAW264.7细胞模型炎性因子的机制,可能与其下调HIF-1α、e IF4E、p70S6K1 m RNA以及HIF-1α、VEGF蛋白表达有关。

胡樱凡^[7]（2019）在《大黄蒽醌类化合物抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应的分子机制及其构效关系的研究》文中指出目的基于TLR4介导的MyD88依.赖信号通路和TRIF依赖信号通路,并结合药效动力学模型和中位效应方程定量地评价大黄酸、大黄素、芦荟大黄素体外抗炎的分子机制与量效关系,进一步明确大黄蒽醌类化合物抗炎活性与分子结构关系的科学内涵。方法1.采用MTT法检测大黄酸、大黄素、芦荟大黄素对RAW 264.7巨噬细胞活性的影响,从而明确三种药物在该细胞系中的安全浓度范围,并确定实验浓度。2.采用预给药实验方案。大黄酸（80μM、40μM、20μM）、大黄素（80μM、40μM、20μM）、芦荟大黄素（20μM、10μM、5μM）分别与RAW 264.7巨噬细胞预孵育30 min后,加入LPS（终浓度1μg/mL）刺激,以LPS加入时间为“零”时间点。在0、5、15、30、60、90、120 min后,取细胞裂解液采用Western blot检测IKKβ、TBK1蛋白及其磷酸化蛋白的表达;0、10、30、60、120、240min后取细胞裂解液,Western blot检测NFκB p65、PI3K、IRF3蛋白及其磷酸化蛋白的表达;0、1、2、4、8、12、24 h后,取细胞裂解液采用Western blot检测iNOS蛋白表达,取细胞上清液采用Griess法检测NO浓度以及采用Elisa试剂盒检测IL-6、TNF-α、IFN-β、IFN-γ。从而考察大黄酸、大黄素、芦荟大黄素对LPS诱导的TLR4-MyD88/TRIF依赖信号通路中上游蛋白以及下游炎性因子与干扰素动态变化的调控作用。3.采用Monolix?2016R1软件建立药效学模型,定量地捕捉大黄酸、大黄素、芦荟大黄素体外抗炎的动态变化与分子机制;同时三个药物分别设置七个浓度剂量组,取上清液分别用于检测IL-6和NO,并计算中位效应方程。结合药效学模型与中位效应方程,明确三种化合物的体外抗炎的量效关系与效价强度。4.分析对比大黄酸、大黄素、芦荟大黄素分子疏水性系数（logP）、极性/非极性去溶剂化能、拓扑极性表面积、分子表面静电势以及穿透磷脂双分子层的过量自由能,与药效学研究关联分析对比,从而揭示大黄蒽醌类化合物体外抗炎与分子结构关系（构效关系）的实质。结果1.0.1μM100μM大黄酸、大黄素以及0.1μM40μM芦荟大黄素在RAW264.7巨噬细胞为安全浓度范围,确定大黄酸、大黄素实验浓度分别为80、40、20μM,芦荟大黄素实验浓度为20、10、5μM。2.LPS可激活RAW 264.7细胞中MyD88依赖信号通路和TRIF依赖信号通路,且所涉及的上游蛋白表达以及下游末端因子的生成均有各自独特的动态变化。IKK-β在LPS刺激5 min后快速磷酸化并达到最高表达水平;NF-κB p65磷酸化水平在LPS刺激后的10 min即可检测到升高,随后逐渐减弱,在120 min时其磷酸化水平再度升高,其磷酸化水平呈振荡曲线趋势;PI3K在LPS刺激后60min迅速升高,并随时间增加而升高;TBK1在LPS刺激后的30 min可检测其磷酸化水平升高,并随时间推移而持续升高;IRF3在LPS刺激后60 min磷酸化水平显着升高,且进入平台期,在60240 min内其磷酸化水平趋于稳定;iNOS蛋白表达水平在LPS刺激后的8 h显着升高,且在8 h24 h内持续升高;细胞上清液中NO的浓度在LPS刺激后的8 h24 h持续升高;细胞上清液中IL-6浓度在LPS刺激后的2 h8 h内显着升高,在8 h24 h其浓度趋于稳定;细胞上清液中TNF-α在LPS刺激后的0 h2 h内陡然升高,在4 h24 h其浓度略有降低且趋于平稳;细胞上清液中未检测到IFN-γ、IFN-β。3.大黄酸、大黄素、芦荟大黄素均可抑制LPS刺激引起的MyD88依赖信号通路和TRIF依赖信号通路的激活,可剂量依赖地下调IKKβ、NFκB p65、PI3K、TBK1、IRF3磷酸化水平,抑制下游iNOS的表达,以及NO、IL-6的分泌。同时观察到大黄蒽醌类化合物对TNF-α的分泌略有上调作用,这与IKKβ的双向调节作用有关。4.中位效应方程的结果表明,三种药物在相同浓度下,芦荟大黄素对IL-6以及NO生成的抑制率均强于大黄素、大黄酸。大黄酸、大黄素、芦荟大黄素抑制LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞生成IL-6的IC50为100.92μM、39.81μM、18.84μM,而抑制NO生成的IC50为53.12μM、46.80μM、17.83μM;药效动力学模型结果表明,大黄蒽醌化合物治疗该体外炎症的药效动力学模型为双靶点抑制模型,对NF-κB p65磷酸化和iNOS蛋白表达均有抑制作用,其中对NF-κB p65磷酸化的对数线性抑制系数为0.0125、0.0208、0.0410,对iNOS蛋白表达的对数线性抑制系数分别为0.0142、0.0587、0.0763,显然对iNOS蛋白表达的抑制作用强于对NF-κB p65磷酸化的抑制作用（约两倍）。中位效应方程与药效动力学模型结果均表明,三种蒽醌化合物体外抗炎机制相同,但具有不同的效价强度:芦荟大黄素>大黄素>大黄酸。但由于溶解度的限制,芦荟大黄素的效能低于大黄素、大黄酸。5.构效关系分析结果表明,三种蒽醌化合物的疏水结构是引起抗炎效价强度差异的主要原因。与大黄素、大黄素、芦荟大黄素结合的受体具有疏水口袋,芦荟大黄素分子结构的疏水作用最强,故其与受体的结合能力亦强于大黄素、大黄酸,从而表现出更强的抗炎能力。结论大黄蒽醌类化合物大黄酸、大黄素、芦荟大黄素可剂量依赖地抑制LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞引起的炎症,其作用机制为双靶点抑制（NF-κB p65和iNOS）。相同剂量下,芦荟大黄素的抗炎作用强于大黄素、大黄酸。三种蒽醌化合物抗炎能力的差异主要源自其分子结构支链引起的疏水作用差异,与蒽醌类化合物结合的受体具有疏水口袋,芦荟大黄素分子结构的疏水作用强于大黄素、大黄酸,故具有更强抗炎效价强度。

尹硕淼^[8]（2019）在《青天葵总黄酮干预急性肺损伤的机制研究》文中认为第一部分 青天葵总黄酮的提取及成份比对目的:提取青天葵中总黄酮成份,并且对该总黄酮提取物进行成份比对。方法:采用“渗漉法”提取青天葵成份,采用AB-8大孔树脂联合聚酰胺方法提取到青天葵总黄酮。采用“高效液相色谱法”及“液相质谱连用法”对该青天葵总黄酮提取物进行成份鉴定。结果:通过对青天葵总黄酮提取物进行成份比对,发现该总黄酮提取物主要含有Complanatuoside（沙苑子苷）与 nervilifordizin A（鼠李秦素-3-O-β-D-木糖-（1→4）-β-D-葡萄糖苷）。结论:青天葵总黄酮的主要成份为Complanatuoside（沙苑子苷）与nervilifordizin A（鼠李秦素-3-0-β-D-木糖-（1→4）-β-D-葡萄糖苷）。第二部分 不同LPS剂量及不同LPS干预时间对BALB/c小鼠ALI模型的影响目的:通过气管内滴注LIPS的造模方式,探讨LPS在三个不同干预时间点对BALB/c小鼠ALI模型状态、体重变化、肺干重湿重变化、肺组织主动转运蛋白和细胞因子、新鲜肺组织外观变化及支气管肺泡灌洗液的影响。方法:将66只BALB/c小鼠随机分为10组,分别是Blank组、6h Sham组、6h 100ug LPS组、6h 200ug LPS 组、24h Sham组、24h 100ugLLPS 组、24h 200ug LPS 组、72h Sham组、72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS组。采用气管内滴注LIPS的方法进行建立急性肺损伤动物模型,Blank组不作任何处理,Sham组予以滴注生理盐水,并于滴注后24h取材。LPS组气道滴注相应剂量的LPS,并在不同时间点进行取材,在造模期间对小鼠的精神状态、活动度、饮食、皮毛情况及体重进行记录;取材时留取肺组织,称取左肺干湿重;取材期间对新鲜肺组织进行外观观察并记录,RT-PCR检测肺组织AQP-1、AQP-5、α ENaC、β ENaC、γENaC、TNF-α、IL-1 β、IL-6、CXCL-1、GM-CSF、CCL-2、CXCL-15、MMP-9、MMP-12的基因表达情况。另取同样处理的小鼠进行气道盥洗液细胞计数。结果:1.小鼠一般情况:Blank组小鼠精神状态佳,呼吸均匀,反应灵敏,毛色油亮光滑,饮食正常。Sham组小鼠术后6h Sham组小鼠状态尚可,呼吸尚均匀,反应尚可,饮食差,毛色较乱;术后24h Sham组小鼠精神状态良好,呼吸均匀,饮食可,毛色正常;术后72h Sham组小鼠精神状态佳,呼吸均匀,反应灵敏,毛色恢复正常颜色,油亮光滑,饮食正常。LPS组小鼠造模后6h,100ug LPS组与200ug LPS组小鼠状态差,呼吸急促,反应迟钝,饮食差,毛色凌乱;造模24h后,100ug LPS组与200ug LPS组小鼠状态差,呼吸急促,伴有喘息及咳嗽,反应迟钝,饮食减少,毛色凌乱发黄;造模72h后,100ug LPS组与200ug LPS组小鼠极差,反应十分迟钝,饮食进一步减少,不欲活动,毛色凌乱发黄无光泽。2.小鼠体重变化:造模后24h,Sham组、100ug LPS组及200ug LPS组体重均减轻,造模后48h,Sham组小鼠体重开始恢复,而100ug LPS组及200ug LPS组体重继续减轻,造模后72h,Sham组小鼠体重已经增加,但100ug LPS组及200ug LPS组体重仍在减轻。3.小鼠湿肺干肺重量比较:湿肺质量比较中,6h Sham组、6h 200ug LPS组较空白组无差异,6h 100ug LPS组较空白组有差异（p<0.05）,6h 100ug LPS组、6h 200ug LPS组较6h Sham组无差异;24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组较空白组有差异（P<0.01）,24h 200ug LPS 组较 24h Sham 组有差异（P<005）;72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS 组较空白组有差异（P<0.01）,72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS组较72h Sham组有差异（P<0.01）。干肺质量比较中,6h Sham组、6h 100ug LPS组、6h 200ug LPS 组较空白组无差异,6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组较 6h Sham组无差异;24h 100ug LPS 组、24h 200ug LPS 组较空白组有差异（P<0.01）,24h 100ug LPS组较24h Sham组有差异（P<0.05）,24h 200ug LPS组较24h Sham组有差异（P<001）;72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS 组较空白组有差异（P<0.01）,72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS组较72h Sham组有差异（P<0.01）。肺湿干重比方面,6h LPS组与Blank组比较有差异（P<0.05）,24h 100ug LPS组与空白对照组比较有差异（P<0.05）,72h LPS组较72h Sham组比较有差异（P<0.05）。小鼠多余肺水量比较中,6h 100ug LPS组较空白组有差异（P<0.01）,6h 100ug LPS组较6h Sham组有差异（P<0.05）,6h 200ug LPS 组较 6h Sham组无差异;24h 100ug LPS 组、24h 200ug LPS 组较空白组有差异（P<0.01）,24h 100ug LPS 组、24h 200ug LPS 组较 24h Sham组有差异（P<0.05）;72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS组较空白组有差异（P<0.01）,72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS 组较 72h Sham 组有差异（P<0.01）。4.肺组织 RT-PCR 检测:AQP-1:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 Blank组、6h Sham组比较存在差异（P<0.01）,6h Sham组和Blank组比较存在差异（P<0.05）;24h 100ug LPS 组、24h 200ug LPS 组与 Blank 组、24h Sham 组比较存在差异（P<0.01）;72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.01）,72h 200ug LPS 组与 72h Sham 组比较存在差异（P<0.01）。AQP-5:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,6h 200ug LPS组与6h Sham组比较存在差异（P<0.01）;24h 100ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.01）,与24h Sham组比较存在差异（P<0.01）,24h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.05）,与24h Sham组比较存在差异（P<0.01）;72h 200ug LPS组与Blank组、72h Sham组比较存在差异（P<0.01）。α ENaC:6h LPS组较空白对照组及6h Sham组比较无差异;24h Sham组、24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组与空白对照组比较无差异,24h LPS组与24h Sham组比较无差异;72h LPS组与空白对照组、72h Sham组比较无差异。β ENaC:6h 100ug LPS组与Blank组比较无差异,与6h Sham组比较存在差异（P<0.05）,6h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.05）,与6h Sham组比较存在差异（P<0.01）;24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.01）,24h 100ug LPS组与24h Sham组比较存在差异（P<0.01）,24h 200ug LPS组与24h Sham组比较存在差异（P<0.05）;72h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.01）,72h 200ug LPS组与72h Sham组比较存在差异（P<0.05）,72h 100ug LPS组与Blank组、72h Sham组比较均无差异。γ ENaC:6h Sham组较空白对照组比较存在差异（P<0.05）,6h 200ug LPS组较6h Sham组比较存在差异（P<0.05）;24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组与空白对照组、24h Sham组比较无差异;72h 100ug LLPS组、72h 200ug LPS组与空白对照组、72h Sham组比较无差异。TNF-α:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与Blank 组比较存在差异（P<0.01）,与 6h Sham 组比较无差异;24h 100ug LPS 组、24h 200ug LPS 组与Blank 组、24h Sham组比较存在差异（P<0.01）,24h Sham组和Blank组比较存在差异（P<0.01）;72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS组与Blank组、72h Sham组比较存在差异（P<0.01）,6h Sham组、24h Sham组与空白组比较有差异（P<0.01）。IL-1 β:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,6h 100ug LPS组与6h Sham组存在差异（P<0.05）,6h Sham组和Blank组比较存在差（P<0.05）;24h 100ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.05）,24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组与24h Sham组比较存在差异（P<0.01）,24h Sham组和Blank组比较存在差异（P<0.05）;在72h组中,72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS组与Blank组、72h Sham组比较存在差异（P<0.01）。IL-6:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 6h Sham 组无差异,6h Sham 组和 Blank 组比较差异（P<0.01）;24h 100ug LPS组与Blank组、24h Sham组比较存在差异（P<005）,24h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.05）,与24h Sham组比较存在差异（P<0.01）;72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS 组与 Blank 组、72h Sham组比较存在差异（P<0.01）。CXCL-1:6h 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 6h Sham 组无差异;24h 100ug LPS 组、24h 200ug LPS 组与 Blank 组、24h Sham组比较存在差异（P<0.01）;72h 100ug LPS组、72h 200ug LPS组与Blank组、72h Sham组比较存在差异（P<0.01）。6h Sham组、24h Sham组与空白组比较存在差异（P<0.o1）。GM-CSF:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,6h 100ug LPS 组与 6h Sham 组比较有差异（P<0.01）,6h 200ug LPS 组与 6h Sham组有差异（P<0.05）,6h Sham组和Blank组比较有差异（P<0.05）;24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.01）,24h 200ug LPS组与24h Sham组存在差异（P<0.01）,24h 100ug LPS组与24h Sham组存在差异（P<0.05）,24h Sham 组和 Blank 组比较存在差异（P<0.05）;72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS组与Blank组、72h Sham组比较存在差异（P<0.05）。CCL-2:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,6h Sham 组和 Blank 组比较有差异（P<0.05）;24h 100ug LPS 组、24h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.01）,24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组与24h Sham组存在差异（P<0.05）,24h Sham组和Blank组比较存在差异（P<0.05）;72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,72h 200ug LPS组与72h Sham组比较存在差异（P<0.05）,72h 100ug LPS组与72h Sham组比较存在差异（P<0.01）。CXCL-15:6h组与Blank组比较无差异,6h LPS组与6h Sham组比较无差异;24h Sham组、24h LPS组与Blank组比较无差异,24h 200ug LPS组较24h Sham组比较有差异（P<0.05）;72h组与Blank组比较无差异,72h LPS组与72h Sham组比较无差异。MMP-9:6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组与 Blank 组比较存在差异（P<0.01）,与6h Sham组比较无差异,6h Sham组和Blank组比较存在差异（P<0.01）;24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS组与Blank组比较存在差异（P<0.01）,24h 200ug LPS组与24h Sham组比较存在差异（P<0.05）,24h 100ug LPS组与24h Sham组比较无差异,24h Sham 组和 Blank 组比较存在差异（P<0.05）;72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS组与Blank组、72h Sham组比较存在差异（P<0.01）。MMP-12:24h LPS组较24h Sham组比较存在差异（P<0.01）;72h 100ug LPS较Blank组比较存在差异（P<0.05）,余比较无差异。5.新鲜肺组织外观:6h组中,6h Sham组肺组织外观可以大片毛细血管出血点,伴有散在淤点,6h 100ug LPS组小鼠肺组织外观可见肺毛细血管出血点,伴有淤点,甚至融合成斑块,6h 200ug LPS组小鼠肺组织外观可见大片肺毛细血管出血点,伴有大片淤斑。24h组中,24h Sham组小鼠肺组织外观新鲜,可见极少量散在淤点,24h 100ug LPS组小鼠肺组织外观可见肺毛细血管充血水肿,伴有毛细血管破裂出血,可见淤点,甚至融合成斑块,24h 200ug LPS组小鼠肺组织外观可见大片肺毛细血管出血点,伴有大片淤斑。72h组中,72h Sham组小鼠肺组织外观正常,未见明显肺毛细血管充血水肿或出血,未见淤斑淤点,72h 100ug LPS组小鼠肺组织充血水肿明显,肉眼可见肺毛细血管破裂,融合形成淤斑淤点,72h 200ug LPS组小鼠肺组织充血水肿非常明显,肉眼可见破裂的肺组织血管,并融合形成大片的淤斑。6.肺泡灌洗液细胞计数情况支气管肺泡灌洗液总细胞计数:6h 100ug LPS组与Blank组比较有差异（P<0.05）,6h 100ug LPS 组、6h 200ug LPS 组和 6h Sham 组比较无差异;24h sham 组与 Blank组比较有差异（P<0.05）,24h 100ug L.PS组、24h 200ug LPS组较Blank组、24sham组比较有差异（P<0.01）,24h Sham组较Blank组有差异（P<0.05）;72h Blank组、72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS 组较 Blank 组比较有差异（P<0.01）,72h100ug LPS组、72h 200ug LPS组与72sham组比较存在差异（P<0.01）。支气管肺泡灌洗中性粒细胞计数:6h Sham组、6h 200ug LPS组较Blank组存在差异（P<0.01）,6h模型组与6h Sham组比较无差异;24h 100ug LPS组、24h 200ug LPS 组较 Blank 组、24sham组比较有差异（P<0.01）;72h 100ug LPS 组、72h 200ug LPS组较Blank组、72hsham组比较有差异（P<0.01）。支气管肺泡灌洗单核巳噬细胞计数:6h组与1Bl ank组比较无差异,6h模型组与6h Sham组比较无差异;24h组与Blank组比较无差异,24h模型组与24h Sham组比较无差异;72h Sham组、72h 100ug LPS组、72h 200ug组与Blank组比较有差异（P<0.01）,72h 200ug 组与 72h Sham 组比较有差异（P<0.05）。结论:1.LPS能够诱导小鼠肺湿重、肺干重、多余肺水量的变化,随着时间延长,肺水含量逐渐增多,至72h时间点肺水含量最多,这种变化在在 6h时间点体现不明显,但在24h时间点及72h时间点变化最明显,肺水含量增多即提示肺水肿越严重。对于肺湿干重比的影响,由于LPS对小鼠的肺湿重、肺干重均有影响,所以造成比值差异不大。2.LPS能够抑制AQP-1、AQP-5、β ENaC的基因水平表达,抑制程度与LPS的100ug或200ug的用药量未见明显正相关关系,但24h 100ug LPS及200ug LPS浓度对AQP-1、AQP-5、β ENaC基因表达的抑制最稳定,而LPS达到200ug时,三个时间点对AQP-1、AQP-5、β ENaC基因的表达都有很强的抑制作用。3.LPS能够促进 TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL-1、CCL-2、GM-CSF、MMP-9 等炎症因子、趋化因子及金属蛋白酶的基因表达,这种促进在6h最强,随着时间的推进,这些因子的基因表达逐渐减弱。新鲜肺组织外观比较上看,随着时间的推移,肺损伤淤血面积及水肿程度会逐渐加深,这种损伤会因为LPS的用量增加而表现出更重的趋势。4.不同浓度的LPS在不同时间的干预下,能引起BALB/c小鼠支气管肺泡灌洗液总细胞数目及细胞分类计数的改变。我们可以发现随着时间的推移,BALF细胞总数、中性粒细胞计数和巨噬细胞计数均有所增长,这也提示肺损伤的情况随时间改变呈逐渐加重趋势。5.对Sham组分析发现,气管内滴注手术创伤或者是生理盐水气管内刺激均能导致Sham组的一些指标基因表达异常,且新鲜肺组织外观发生改变,以6h时间点为甚,但在72h是有些指标和Blank组或与之相对应的Sham组比较又无差异,所以取材时间可选择在24h时间点。第三部分 青天葵总黄酮干预急性肺损伤BALB/c小鼠模型的研究（一）目的:在本部分实验中,我们将对青天葵总黄酮干预急性肺损伤BALB/c小鼠ALI模型的研究进行探讨,青天葵总黄酮被分为3个浓度阶梯,分别为40mg/kg、180mg/kg、320mg/kg三个用药组,采用经气管内滴注10mg/kg LPS干预24h建立ALI模型,从小鼠肺湿干重比、多余肺水量、炎症因子、趋化因子、金属蛋白酶的角度来探讨青天葵总黄酮干预急性肺损伤的作用,并通过对肺水转运蛋白和紧密连接蛋白的检测,明确青天葵总黄酮治疗小鼠急性肺损伤的作用机制。方法:将64只BALB/c小鼠随机分为7组,分别是Blank组、Sham组、LPS Model组、40mg/kg 给药（40mg/kg TCM）组、180mg/kg 给药（180mg/kg TCM）组、320mg/kg给药（320mg/kg TCM）组,地塞米松（5mg/kg DEX）组。每天灌胃1次,连续灌胃7天,最后1次给药为造模后30min。Sham组与LPS Model组分别灌胃相同剂量的溶剂,即0.2ml NS。地塞米松（5mg/kg DEX）组给予每只小鼠5mg/kg DEX腹腔注射,即每只小鼠腹腔注射0.1mg DEX/0.1ml NS,腹腔注射为造模后30min进行,空白组不做处理。采用气管内滴注10mg/kg LPS的方式建立模型,干预24h后对小鼠进行取材。左肺行湿重、干重比较,其余肺组织-80℃冷冻,RT-PCR检测AQP-1、AQP-5、α ENaC、β ENaC、γ ENaC、Claudin-3、Claudin-4、Claudin-18、Occludin、Z0-1、TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL-1、GM-CSF、MMP9 等指标。结果:1.肺干重湿重比较:在湿重比较中,LPS组与Sham组比较存在差异（P<0.01）;180mg/kg组较LPS组存在差异（P<0.01）,其余用药组与LPS组比较无差异。干重比较中,LPS组与Sham组比较存在差异（P<0.01）,用药组与LPS组无差异。W/D组中,LPS组与Sham组比较存在差异（P<0.01）;180mg/kg组较LPS组存在差异（P<0.01）,其余用药组与LPS组比较无差异。多余肺水量比较中,LPS组与Sham组比较存在差异（P<0.01）;180mg/kg组较LPS组存在差异（P<0.01）,其余用药组与LPS组比较无差异。2.肺组织RT-PCR 比较:Occludin:LPS组较Sham组存在差异（P<0.01）,180mg/kg TCM组较LPS组存在差异（P<0.05）,5mg/kg DEX组较LPS组存在差异（P<0.01）。TNF-α 及 IL-1 β:LPS 较 Sham 组存在差异（P<0.01）,与 180mg/kg TCM组比较有差异（P<0.05）。AQP-1、AQP-5、α ENaC、βENaC、γENaC、Claudin-3、Claudin-4、Claudin-18、Z0-1、IL-6、CXCL-1、GM-CSF、MMP9 基因表达情况未见差异。结论:青天葵总黄酮能够降低肺湿干重比及多余肺水量,从而缓解LPS诱导的急性肺损伤BALL1B/c小鼠肺水肿情况,其机制可能是通过升高紧密连接蛋白Occludin的基因表达,降低TNF-α、IL-1β的基因表达来实现的。第四部分 青天葵总黄酮干预急性肺损伤BALB/c小鼠模型的研究（二）目的:探讨青天葵总黄酮对急性肺损伤BALB/c小鼠ALI模型肺组织病理学、支气管肺泡灌洗液计数、Occludin的蛋白表达的影响。方法:将32只SPF级BALB/c小鼠随机分为4组,其中Sham组8只、Sham+180mg/kg TCM组 8 只,LPS Model 组 8 只,LPS+180mg/kg TCM 给药组 8 只。Sham+180mg/kg TCM 组及LPS+180mg/kg TCM给药组小鼠给予3.6mg青天葵总黄酮/0.2ml NS灌胃,Sham组和LPS Model组给予0.2ml NS灌胃,每日1次,连续7天,最后1次给药为造模后30min。采用气管内滴注1Omg/kg LPS的方式建立模型,干预24h后对小鼠进行取材。右肺中叶多聚甲醛固定,行HE切片,留取小鼠BALF,行总细胞计数及分类计数,剩余肺组织-80℃冻存,待检Occludin蛋白表达情况。结果:1.支气管肺泡灌洗液细胞计数比较:支气管肺泡灌洗液总细胞计数比较:LPS组较Sham组比较存在差异（P<0.01）,LPS+TCM组较LPS组比较存在差异（P<0.05）。支气管肺泡灌洗液中性粒细胞计数比较:LPS组较Sham组比较存在差异（P<0.01）,LPS+TCM组较LPS组比较存在差异（P<0.01）。气管肺泡灌洗液巨噬细胞计数比较:LPS组较Sham组比较无差异（P>0.05）,LPS+TCM组较LPS组比较无差异（P>0.05）。2.肺组织病理学及评分:Sham组及Sham+LPS组肺HE切片可见肺组织结构完整,未见肺水肿,可见巨噬细胞及少量中性粒细胞,LPS组肺HE切片可见肺组织结构遭到破坏,肺间质水肿明显,伴有大量中性粒浸润,肺泡出现塌陷,且存在肺不张,LPS+TCM组损伤程度低于LPS组。评分结果显示,LPS组评分较Sham组比较,存在差异（P<0.01）,LPS+TCM组较LPS组存在差异（P<0.01）。3.Western Blot检测Occludin的蛋白表达:LPS组Occludin蛋白表达量低于Sham组,较Sham组存在差异（P<0.01）,LPS+TCM组Occludin蛋白表达量高于LPS组,较LPS组存在差异（10<0.01）。结论:青天葵总黄酮能够通过降低支气管肺泡灌洗液中的总细胞数及中性粒细胞数,改善肺组织病理学,促进肺组织中紧密连接蛋白Occludin的蛋白表达,从而起到保护LPS所诱导的ALI的作用。

闫姝含^[9]（2013）在《多拉菌素的抗炎作用及其对相关信号转导通路的调控》文中认为多拉菌素（Doramectin）是新一代大环内酯类抗寄生虫药物，属伊维菌素的衍生物。主要用于治疗胃肠道蛔虫，肺蠕虫，眼丝虫，虱，和疥螨等引起的寄生虫病。已有研究表明大环内酯类抗生素除具有抗菌驱虫作用外，还具有抗炎活性。本文对多拉菌素的抗炎作用进行了深入研究。通过LPS刺激小鼠RAW264.7单核-巨噬细胞建立体外炎症反应模型，研究多拉菌素的体外抗炎活性，并在此基础上借助炎性信号传导通路平台进一步探索其分子抗炎作用机制。同时通过构建内毒素血症，急性肺损伤，过敏性哮喘和特应性皮炎模型，评估多拉菌素对四种不同的炎症动物模型的保护作用。首先通过建立LPS诱导的小鼠RAW264.7单核-巨噬细胞体外炎症模型，研究不同浓度的多拉菌素对RAW264.7细胞分泌细胞因子TNF-α，IL-6和IL-1β及炎性介质NO和PGE2的影响。结果显示，多拉菌素显着抑制了TNF-α，IL-6和IL-1β的分泌，并成剂量依赖关系。同时抑制了NO和PGE2的合成。以上数据表明，多拉菌素能够通过调节细胞因子和炎性介质的分泌而发挥体外抗炎作用。LPS诱导巨噬细胞分泌细胞因子与炎性介质的机制已被深入研究，其中TLR4受体和常见的两条炎症信号转导通路NF-κB和MAPKs起到了重要的作用。TLR4是介导内毒素诱导炎症反应最重要的受体，而NF-κB和MAPKs通路常被作为抗炎分子机制的重要靶位。本实验通过LPS诱导小鼠RAW264.7细胞，检测多拉菌素对TLR4受体，NF-κB和MAPKs信号转导通路的影响，进而研究多拉菌素的抗炎分子机制。结果显示，多拉菌素显着抑制了LPS诱导小鼠RAW264.7细胞TLR4受体的表达、NF-κB的活力，同时显着抑制了p38MAPKs和ERK1/2MAPKs的蛋白表达。结果表明，多拉菌素通过抑制TLR4受体的表达，调控NF-κB、ERK1/2和p38MAPKs信号通路，从而抑制细胞因子TNF-α，IL-6和IL-1β及炎性介质NO和PGE2的合成。在体外实验的基础上，我们进一步研究了多拉菌素的体内抗炎作用，从而为临床疗效提供全面的理论基础。通过构建LPS诱导的小鼠内毒素血症模型，研究不同浓度的多拉菌素对小鼠内毒素血症的治疗作用，确定多拉菌素最佳抗炎剂量，及多拉菌素对小鼠血清中TNF-α，IL-6，IL-8，IL-10和IL-1β分泌的影响。实验结果显示，多拉菌素显着提高了内毒素血症小鼠的生存率，并显着下调了血清中TNF-α，IL-6，IL-8的表达，提高了IL-10的表达水平，但对IL-1β的作用并不显着。因此多拉菌素可通过调节小鼠血清中细胞因子的表达水平提高LPS诱导内毒素血症小鼠的生存率，对内毒素血症小鼠有良好的保护作用。通过构建LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型，研究最佳抗炎剂量的多拉菌素（3mg/kg）对肺损伤小鼠的保护作用。结果显示，预服多拉菌素可以显着抑制ALI小鼠肺组织湿重/干重比、肺泡灌洗液中总蛋白的浓度、炎性细胞的数量、MPO的活性；显着抑制了肺泡灌洗液中TNF-α，IL-6和IL-1β的分泌水平；肺组织病理切片显示，多拉菌素显着降低了由LPS诱导引起的肺组织的损伤，说明多拉菌素对ALI小鼠具有一定的保护作用。通过构建OVA诱导的过敏性哮喘模型，研究多拉菌素（3mg/kg）对过敏性哮喘小鼠的保护作用。结果显示，预服多拉菌素可显着抑制血清中OVA特异性的IgE和IgG的水平；降低肺泡灌洗液中IL-4，IL-5，IL-13和CCL11的表达量，提高了IFN-γ的水平，而对IL-10无显着作用；抑制肺泡灌洗液中总细胞和嗜酸性粒细胞的数量；降低了肺阻力并升高了肺动态顺应性；肺组织切片显示，多拉菌素显着降低了出现在支气管和血管周围的炎性细胞浸润、黏液分泌增多以及杯状细胞的增生等。以上结果表明，多拉菌素对由OVA诱导的过敏性哮喘小鼠有一定的保护作用。通过构建TNCB诱导的特应性皮炎模型，研究多拉菌素（3mg/kg）对特应性皮炎小鼠的保护作用。结果显示，预服多拉菌素可以显着抑制血清中IgE的表达；下调小鼠耳组织液中IL-4，IL-6，IL-1β和IL-18的水平；抑制皮损处MPO的活性；降低了淋巴结中总细胞和淋巴细胞的数量；促进淋巴细胞分泌IFN-γ，抑制其分泌IL-4和IL-13；耳组织切片显示，多拉菌素减轻了表皮层和真皮层的炎性病变程度、降低了组织中炎性细胞的浸润，抑制了耳壳水肿的程度。以上结果表明，多拉菌素对由TNCB诱导的AD小鼠有一定的保护作用。本文首次证明了多拉菌素具有体内外的抗炎活性，并在此基础上进一步证实多拉菌素是通过对TLR4-NF-κB、ERK1/2和p38MAPKs等信号转导通路的调控来发挥抗炎作用的。为该药在临床上的合理应用提供充分的理论依据。

关爽^[10]（2011）在《红景天苷的抗炎作用及其对炎症信号转导通路的调控》文中研究表明红景天苷（salidroside）是传统中药红景天中最重要的有效成份之一,临床上具有抗疲劳,抗氧化,保肝,改善血液循环等多种药理功能。为了提高红景天苷的药用价值,进一步扩大该药在临床上的应用范围,本文对红景天苷的抗炎作用进行了深入研究。首先,利用脂多糖（LPS）刺激小鼠RAW 264.7单核-巨噬细胞建立的体外炎症反应模型,研究红景天苷的体外抗炎活性,并借助细胞内第二信使和炎性信号转导通路平台进一步探索它的分子抗炎作用机制。在此基础上,构建LPS所致小鼠急性肺损伤模型和内毒素血症模型,检测红景天苷对两种动物模型的保护和治疗作用。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,它可以激活巨噬细胞释放多种炎性细胞因子如肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）等及炎性介质如一氧化氮（NO）和前列腺素E2（PGE2）等,从而形成瀑布效应,导致多种炎症疾病发生,甚至死亡。因此,LPS激活的巨噬细胞已被广泛用于评价各种化学物质的抗炎作用。本论文首先通过建立LPS诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW 264.7的体外炎症模型,研究了不同浓度红景天苷对RAW 264.7细胞的细胞因子TNF-α,IL-1β和IL-6及炎性介质NO和PGE2分泌的影响。结果显示,红景天苷抑制了TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌,这与其mRNA的表达结果一致,并呈现剂量依赖性。另外,红景天苷还能抑制NO、PGE2的合成。以上数据表明,在体外实验中,红景天苷能够通过调节细胞因子和炎性介质的分泌而发挥抗炎作用。我们又进一步对LPS诱导细胞因子及炎性介质产生的机制进行了深入研究,细胞第二信使[Ca2+]i、cAMP/cGMP通路和最常见的两条炎性信号转导通路NF-κB和MAPKs起了关键作用。本实验通过用LPS刺激小鼠的RAW 264.7细胞,测定红景天苷对第二信使[Ca2+]i、cAMP/cGMP信号通路、NF-κB和MAPKs信号转导通路的影响。结果显示,红景天苷显着抑制了LPS刺激的小鼠RAW 264.7巨噬细胞[Ca2+]i浓度、NF-κB的活力和ERK、p38 MAPKs蛋白表达,作用呈剂量依赖方式,同时升高了cAMP浓度,但对cGMP无影响。这说明,红景天苷通过调控[Ca2+]i、cAMP、NF-κB、ERK和p38 MAPKs通路而抑制细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β分泌和炎性介质NO、PGE2合成。在体外实验的基础上,我们进一步验证了红景天苷在体内的抗炎作用。通过LPS诱导建立了急性炎症肺损伤模型,来研究预注射红景天苷（120 mg/kg）对急性肺损伤的作用。通过收集肺组织以测定湿干重（W/D）比率、髓过氧化物酶（MPO）活性和观察病理组织学的变化,制备支气管肺泡灌洗液（BALF）以检测蛋白浓度、炎性细胞因子浓度。结果显示预服用红景天苷能显着地降低小鼠肺的干湿重的比率、支气管肺泡灌洗液中蛋白浓度、炎性细胞数量和MPO的活性,抑制了TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌,病理切片表明红景天苷明显地减弱LPS导致的肺组织损伤。表明红景天苷对LPS诱导的急性炎症肺损伤具有保护作用。在LPS诱导的小鼠内毒素血症模型中,我们研究了红景天苷对小鼠内毒血症的预防和治疗作用及对小鼠血清中细胞因子TNF-α,IL-1β,IL-6分泌的影响。实验结果显示,红景天苷通过对小鼠血清炎性细胞因子的抑制作用,提高了内毒血症小鼠的生存率,对小鼠内毒素血症产生较好的预防和治疗作用。

二、大黄对内毒素刺激巨噬细胞分泌和细胞[Ca~(2+)]_i的抑制作用特征（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、大黄对内毒素刺激巨噬细胞分泌和细胞[Ca~(2+)]_i的抑制作用特征（论文提纲范文）

（1）NAFLD中医组方规律分析和中医证候特征调查及葱白提取物治疗NAFLD大鼠的机制研究（论文提纲范文）

（2）清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究（论文提纲范文）

（3）基于“靶点预测—自噬凋亡”的祖卡木颗粒及其药味组合对AM作用研究（论文提纲范文）

（4）基于斑马鱼模型的中药抗内毒素活性筛选及甘草苷抑制LPS诱导急性肺损伤作用机制研究（论文提纲范文）

（5）猴腿蹄盖蕨提取物体内外抗炎作用研究（论文提纲范文）

（6）大黄调控mTOR/HIF-1a/VEGF信号通路治疗急性肺损伤的机制研究（论文提纲范文）

（7）大黄蒽醌类化合物抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应的分子机制及其构效关系的研究（论文提纲范文）

（8）青天葵总黄酮干预急性肺损伤的机制研究（论文提纲范文）

（9）多拉菌素的抗炎作用及其对相关信号转导通路的调控（论文提纲范文）

（10）红景天苷的抗炎作用及其对炎症信号转导通路的调控（论文提纲范文）

四、大黄对内毒素刺激巨噬细胞分泌和细胞[Ca~(2+)]_i的抑制作用特征（论文参考文献）

• [1]NAFLD中医组方规律分析和中医证候特征调查及葱白提取物治疗NAFLD大鼠的机制研究[D]. 刘云. 湖北中医药大学, 2021(01)
• [2]清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究[D]. 朱长乐. 北京中医药大学, 2020(04)
• [3]基于“靶点预测—自噬凋亡”的祖卡木颗粒及其药味组合对AM作用研究[D]. 李丝雨. 北京中医药大学, 2020(04)
• [4]基于斑马鱼模型的中药抗内毒素活性筛选及甘草苷抑制LPS诱导急性肺损伤作用机制研究[D]. 周红玲. 南方医科大学, 2020
• [5]猴腿蹄盖蕨提取物体内外抗炎作用研究[D]. 韩雄哲. 延边大学, 2019(03)
• [6]大黄调控mTOR/HIF-1a/VEGF信号通路治疗急性肺损伤的机制研究[D]. 董伟. 上海中医药大学, 2019(03)
• [7]大黄蒽醌类化合物抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应的分子机制及其构效关系的研究[D]. 胡樱凡. 成都中医药大学, 2019(04)
• [8]青天葵总黄酮干预急性肺损伤的机制研究[D]. 尹硕淼. 广州中医药大学, 2019(04)
• [9]多拉菌素的抗炎作用及其对相关信号转导通路的调控[D]. 闫姝含. 吉林大学, 2013(08)
• [10]红景天苷的抗炎作用及其对炎症信号转导通路的调控[D]. 关爽. 吉林大学, 2011(05)

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