一、CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响（论文文献综述）
张红超[1]（2021）在《102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察》文中研究说明角膜溃疡（Cornea Ulceration）是兽医临床较常见的眼科疾病,其病原菌主要为伪中间葡萄球菌（Staphylococcus Pseudintermedius）。目前,治疗角膜溃疡的方法是药物治疗和药物治疗联合手术治疗,如联合带蒂板层角膜移植手术或带蒂结膜瓣遮盖术。但是,对这两种手术的临床疗效比较没有系统的研究。本研究首先对郑州地区102例角膜溃疡犬进行流行病学分析,然后依据流行病学调查情况,用主要致病菌构建犬角膜溃疡模型,进而观察带蒂板层角膜移植术和带蒂结膜瓣遮盖术对角膜溃疡的疗效。现将研究情况报告如下:试验一:102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌的分离鉴定与耐药性分析收集2017年6月至2019年12月间郑州市三家宠物医院收治的102例犬角膜溃疡病例,统计其发病原因、年龄、性别、品种、治疗方法及预后等,并使用无菌生理盐水浸湿的细胞刷蘸取溃疡灶样品,对采集的样品进行细菌培养与纯化,然后使用MALDI Biotyper系统对分离的菌株进行鉴定。同时,将所分离的主要菌株做眼科常用药物的敏感性试验。试验结果如下:（1）发病率较高的品种为贵宾、比熊、京巴、柯基和混血犬;年龄从2月龄至19岁不等,平均年龄为5.8±0.54岁,发病原因主要以外伤（22例,21.57%）和干眼症（14例,13.73%）为主。（2）细菌培养阳性99例,以伪中间葡萄球菌感染的混合感染病例为主;体外抑菌有效的抗生素有头孢甲肟（96.94%）、利福平（98.98%）、妥布霉素（97.96%）、左氧氟沙星（93.88%）和环丙沙星（96.94%）;而对四环素（91.84%）、红霉素（96.94%）和氯霉素（51.02%）有耐药性。试验二:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性犬角膜溃疡的疗效观察选用15只健康成年比格犬,使用微量注射器吸取伪中间葡萄球菌菌液注入角膜基质层内构建犬角膜溃疡模型。造模后48 h,使用0.5%聚维酮碘生理盐水溶液对溃疡灶进行冲洗。同时滴加氧氟沙星滴眼液和玻璃酸钠滴眼液12次/d,两种药物用药间隔为1 min。造模成功后,随机选择3只犬用于抗生素治疗组,12只犬用于抗生素联合手术治疗组,手术治疗组在术眼消毒后进行手术治疗,其中左眼行带蒂板层角膜移植术,右眼行带蒂结膜瓣遮盖术。并于术后7、14、21、28、35和42 d统计相关临床指标和信息。根据临床观察指标和症状进行评分。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组实验犬在治疗后36-46h内均出现角膜穿孔,前房塌陷,虹膜脱出,羞明,流泪,眼分泌物增多;角膜大面积水肿、不透明,多象限内可见新生血管。单纯抗生素治疗组治疗无效。（2）手术治疗组角膜浑浊度评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7、14和21 d带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后28d,两组间无统计学差异;术后35和42d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）。（3）手术治疗组角膜新生血管评分:术前及术后7d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后14、21、28和35d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（4）手术治疗组角膜水肿面积评分:术前两组间无统计学差异（p>0.05）;术后7和14 d,带蒂板层角膜移植组评分显着或极显着高于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01或p<0.05）;术后21、28、35和42d,两组间无统计学差异（p>0.05）。（5）手术治疗组泪液量检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。（6）手术治疗组眼内压检测结果:术前及术后2-6d,两组间无统计学差异（p>0.05）;术后8-18、32、38和42 d,带蒂板层角膜移植组评分极显着低于带蒂结膜瓣遮盖组（p<0.01）;在其余时间点,两组间无统计学差异（p>0.05）。试验三:不同治疗方法对伪中间葡萄球菌性角膜溃疡犬角膜组织病理学及相关细胞因子表达的影响将抗生素联合手术治疗组的12只实验犬随机分成四组,分别于术后14、28、35和42 d进行手术采取角膜。将采集的角膜沿手术位置一分为二,一半用于组织切片制作,一半用于荧光定量检测细胞因子。试验结果如下:（1）单纯抗生素治疗组的组织病理学变化:角膜上皮层缺失,结构不完整,内皮细胞层部分区域缺失,后弹力层缺失。溃疡灶内可见新生肉芽组织,但无法完全闭合溃疡灶。（2）手术治疗组的组织病理学变化:带蒂板层角膜移植组角膜结构完整,角膜上皮层重新上皮化,纤维蛋白排列整齐有序,后弹力层和内皮层结构完整。带蒂结膜瓣遮盖组溃疡灶处完全覆盖结膜上皮,细胞密度高,排列杂乱无章,基质层可见新生血管,纤维蛋白排列无序。后弹力层和内皮层结构完整。（3）炎性因子基因表达的变化:术后14和28 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）;术后35d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TLR2和TNF-α的mRNA相对表达量极显着升高（p<0.01）,其余炎性因子基因表达量在两组间无统计学差异（p>0.05）;术后42d,两组各炎性因子基因表达量无统计学差异（p>0.05）。（4）生长因子基因表达的变化:术后14 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中VEGF、FGF和TGF的mRNA相对表达量均显着或极显着升高（p<0.05或p<0.01）。术后28d,两组各细胞因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。术后35和42 d,与带蒂结膜瓣遮盖组相比,带蒂板层角膜移植组中TGF的mRNA相对表达量显着降低（p<0.05）,其余生长因子的mRNA相对表达量无统计学差异（p>0.05）。试验四:带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察对犬深层角膜溃疡临床病例采取带蒂板层角膜移植术后,连续观察至60 d。术后泪液量均在正常值范围内波动,眼内压在术后5-11 d内低于正常值范围,其余时间点均在正常值范围内。没有病例出现重复感染,术后恢复效果良好,视力均得到恢复。综上所述,郑州市102例犬角膜溃疡病例中的犬品种多为泰迪和短头颅犬,感染的细菌主要为伪中间葡萄球菌且对红霉素、氯霉素和四环素类药物耐药;板层角膜移植手术的术后恢复效果优于结膜瓣遮盖术,角膜愈合与透明度良好,纤维蛋白排列整齐有序,上皮层结构完整。
刘倩[2]（2020）在《施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用研究》文中指出研究背景神经源性膀胱（Neurogenic bladder,NB）是小儿外科常见的疾病,目前的各种治疗办法只能缓解病人的症状,无法从根本上对膀胱储尿、排尿的功能进行改善。一个重要的原因在于,随着病情的进展多数患儿会出现膀胱纤维化的病理改变,膀胱容量明显减小,顺应性降低,出现显着小梁化改变,正常的膀胱壁组织被异常增生的结缔组织的浸润取代,最终形成一个小容积、高压力的囊袋,导致膀胱失去正常功能。因而研究导致膀胱发生纤维化的主要致病因素并采取有效的干预措施对阻止疾病的进展具有非常重要的意义。既往研究证实,胶原蛋白等细胞外基质成分沉积于不同器官,如心、肝、肺等,可导致不同病理状态下的器官纤维化,与这些器官类似,膀胱纤维化的特点是膀胱壁内胶原沉积。结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor,CTGF）可能在介导组织、器官纤维化的发生、发展中起十分重要的作用。膀胱失神经支配后会引起膀胱纤维化,这可能是由于功能不全的神经细胞,无法给膀胱细胞提供必要的营养物质,进而导致膀胱细胞功能紊乱,最终导致纤维化的发生。既往研究发现膀胱逼尿肌的功能失调,与支配逼尿肌神经的功能具有相关性。我们据此猜测,神经支配及神经营养物质对膀胱纤维化过程有某种作用。施万细胞（Schwann cell）是外周神经系统中具有重要功能的一种胶质细胞,它可以通过分泌包含脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）在内 的多种神经营养因子发挥神经营养、促进神经组织再生等作用。目前还没有相关研究揭示施万细胞在膀胱纤维化中的作用。本次研究共分为2个部分,第一部分为:大鼠失神经支配膀胱纤维化模型的建立及CTGF在膀胱纤维化中的作用研究;第二部分为:施万细胞和BDNF在膀胱平滑肌细胞纤维化中的作用及可能的机制研究。第一部分大鼠失神经支配膀胱纤维化模型的建立及CTGF在膀胱纤维化中的作用研究研究目的采用大鼠去神经支配建立NB膀胱纤维化模型,观察不同时间点膀胱组织形态学的变化以及CTGF随着膀胱纤维化的发展的变化趋势。分离出膀胱平滑肌细胞（Bladder smooth muscle cells,BSMCs）并培养,应用CTGF作用于培养的BSMCs,观察纤维化相关指标的变化,研究CTGF在膀胱纤维化中的作用。研究方法应用雌性SD大鼠去神经支配建立NB膀胱纤维化模型。采用体重160-200g,成年雌性SD大鼠32只,将大鼠随机分为4组（n=8/组）,其中一组接受假手术,10天后处死,另三组采用电灼破坏双侧盆神经节的方法建立去神经支配模型,分别在去神经10天、20天和30天后处死。摘取大鼠膀胱组织,进行苏木精伊红（Hematoxylin and eosin,H&E）染色,观察膀胱壁组织结构的变化;再进行Masson染色进一步评价膀胱组织有无纤维化及纤维化的程度。应用免疫组织化学方法检测膀胱组织中CTGF的表达。切取SD大鼠膀胱组织,分离并培养BSMCs,用CTGF处理BSMCs,应用免疫荧光染色观察α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达的变化,应用蛋白质免疫印迹（Western Blot）方法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白（CollagenⅠ,ColⅢ;Collagen Ⅲ,Col Ⅲ）的表达水平,探索CTGF对纤维化的作用。结果1.膀胱组织H&E染色特点:在膀胱去神经支配构建的NB大鼠模型中,膀胱组织平滑肌细胞排列紊乱,逼尿肌细胞被增多的胶原纤维分割。在粘膜下层、肌层等可见炎性细胞浸润,另外随着造模时间的延长,膀胱平滑肌组织显着减少,而膀胱壁纤维结缔组织明显增生。2.Masson染色结果:与H&E染色一致,NB大鼠模型中呈红染的膀胱平滑肌组织以时间依赖性方式显着减少,蓝染的胶原纤维显着增加（与对照组比较,NB第10天,P<0.05;NB第20天,P<0.01;NB第30天,P<0.01）,提示膀胱组织纤维化在逐渐加重。以上结果表明,大鼠NB模型建立成功。3.CTGF免疫组织化学染色结果:在NB大鼠模型中,膀胱组织平滑肌及粘膜移行上皮可见CTGF着色明显,平滑肌细胞内可见粗大的棕色颗粒沉积,造模后20天CTGF表达最明显（与对照组比较,NB第10天,P>0.05;NB第20天,P<0.0001;NB第30天,P<0.001）,粘膜下层无明显棕色颗粒沉积。这些结果表明CTGF在NB模型组膀胱组织中的表达显着增加,提示其可能在膀胱纤维化发生中起重要作用。4.为了进一步证实CTGF对膀胱纤维化发生的影响,分离出原代BSMCs,并施加CTGF作用。免疫荧光染色发现,用CTGF处理后BSMCs的α-SMA显着增加（P<0.0001）;Western blot蛋白印迹分析显示BSMCs的Col Ⅰ和Col Ⅲ明显增加（P<0.01）。提示CTGF可能在NB中促进BSMCs的纤维化。结论1.电灼破坏双侧盆神经节的方法可成功建立大鼠去神经支配致膀胱纤维化的模型。2.失神经支配可导致膀胱纤维化的发生,CTGF可能在膀胱纤维化发生中起重要促进作用。第二部分施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用及其机制的研究研究目的检测大鼠膀胱纤维化模型不同时间段膀胱组织中BDNF表达水平,观察去神经支配的大鼠膀胱组织中BDNF含量的变化趋势。分离出BSMCs和施万细胞。将BSMCs进行单独培养或与施万细胞共培养,在培养的细胞体系中应用CTGF诱导纤维化的发生,检测不同培养体系中α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达水平,观察施万细胞对BSMCs纤维化有无抑制作用。进一步实验探究施万细胞对BSMCs纤维化的作用是否是由BDNF介导。通过检测不同实验组基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和组织金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases 1,TIMP-1）表达情况,进一步揭示施万细胞和BDNF对BSMCs纤维化作用的潜在作用机制。研究方法利用本实验第一部分大鼠去神经支配建立的膀胱纤维化模型,通过酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent,ELISA）检测失神经第10天、20天和30天膀胱组织中BDNF的表达,观察去神经支配的大鼠膀胱组织中BDNF含量的变化趋势。从新生SD大鼠的坐骨神经中分离出施万细胞,与BSMCs共培养,施加CTGF诱导BSMCs,应用免疫荧光染色观察α-SMA表达,Western Blot方法检测Col Ⅰ和Col Ⅲ的表达水平,对比共培养体系与BSMCs单独培养纤维化指标的差异,评估施万细胞在膀胱纤维化中的作用。进一步通过ELISA检测BDNF在CTGF干预的共培养体系与单独培养的BSMCs中的变化情况,初步探索施万细胞对膀胱纤维化产生保护作用是否由BDNF介导。β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测施万细胞有无发生衰老,以排除施万细胞衰老对共培养体系实验结果的影响。根据是否与施万细胞共培养、施加BDNF作用等因素的差异设立不同的实验组:A组:BSMCs对照组,B组:BSMCs+CTGF作用,C组:BSMCs与施万细胞共培养+CTGF作用,D组:BSMCs+BDNF+CTGF作用。应用免疫荧光染色观察α-SMA、Col Ⅰ和Col Ⅲ表达的变化,进一步验证施万细胞对BSMCs纤维化的保护作用由BDNF介导。应用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qPCR）检测各组 MMP-1、MMP-2 和 TIMP-1 mRNA 表达情况,揭示BDNF对BSMCs纤维化抑制作用的潜在机制。结果1.NB大鼠膀胱组织中BDNF含量显着降低。通过ELISA检测膀胱组织BDNF,发现NB去神经支配的大鼠膀胱组织中BDNF明显减少,且呈时间依赖性地降低（与对照组比较,NB第10天,P<0.01;NB第20天,P<0.001;NB第30天,P<0.0001）,这表明BDNF可能在NB膀胱纤维化中发挥保护作用。2.施万细胞能显着减轻BSMCs的纤维化。免疫荧光染色结果显示,在经过CTGF诱导纤维化之后,相较于BSMCs单独培养,BSMCs与施万细胞共培养体系中α-SMA表达降低（P<0.0001）,Western Blot结果显示BSMCs与施万细胞共培养体系中的Col Ⅰ和Col Ⅲ含量也显着降低（Col Ⅰ,P<0.001;Col Ⅲ,P<0.01）。这些结果表明,施万细胞能明显减轻CTGF诱导的BSMCs纤维化,并可能在NB膀胱纤维化中发挥保护作用。3.酶联免疫吸附试验表明,与单独培养的BSMCs相比,在施万细胞与BSMCs共培养体系中,BDNF表达显着增加（P<0.01）,这表明施万细胞对BSMCs纤维化的保护作用可能是通过BDNF介导的。4.β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色显示各组的阳性密度相当,表明施万细胞在CTGF干预及共培养体系均没有发生衰老。5.在进一步实验中,免疫荧光染色法观察到B组与A组比较,其α-SMA、ColⅠ和Col Ⅲ表达增强（P<0.0001）,这进一步验证了 CTGF能促进BSMCs纤维化的发生。C组与B组比较,其α-SMA表达降低（P<0.0001）,ColⅠ表达降低（P<0.05）,Col Ⅲ 表达降低（P<0.01）。D 组与 B 组比较,其 α-SMA、ColⅠ和 ColⅢ表达降低（P<0.0001）。提示施万细胞和BDNF均能抑制CTGF诱导的BSMCs的纤维化,施万细胞对纤维化的保护作用可能是通过BDNF产生的。6.通过对MMP-1、MMP-2和TIMP-1 mRNA表达的检测发现,B组与A组比较,MMP-1、MMP-2mRNA 表达降低,TIMP-1 mRNA 表达升高（P<0.0001）,提示CTGF可通过下调BSMCs中MMP-1 mRNA、MMP-2mRNA表达,上调TIMP-1 mRNA的表达促进纤维化的发生。同B组比较,C组MMP-1 mRNA（P<0.01）、MMP-2 mRNA（P<0.05）表达升高,TIMP-1 mRNA 表达降低（P<0.0001）;D 组MMP-1 mRNA（P<0.0001）、MMP-2 mRNA（P<0.01）亦存在表达升高,TIMP-1 mRNA也表现出表达降低（P<0.0001）,与C组中的表达变化趋势一致,施万细胞与BDNF均可逆转CTGF诱导BSMCs纤维化过程中的MMP-1、MMP-2 mRNA的表达下调与TIMP-1 mRNA的表达上调,进一步揭示了施万细胞可能通过分泌BDNF对BSMCs中MMP-1、MMP-2、TIMP-1表达水平进行调节,从而抑制纤维化的发生。结论1.施万细胞显着抑制BSMCs纤维化,这种作用与其产生BDNF的功能有关。2.施万细胞可能通过分泌BDNF对BSMCs中MMP-1、MMP-2、TIMP-1表达水平进行调节,从而抑制膀胱纤维化的发生。
刘文[3]（2020）在《CTGF通过诱导FSTL1表达影响哮喘气道重塑机制的研究》文中研究说明研究背景支气管哮喘（bronchial asthma）简称哮喘,是一种常见的慢性呼吸系统疾病,而气道高反应性、气道炎症及气道重塑是其三个重要的特征。目前针对气道炎症及气道高反应性的治疗方法可以有效地预防和缓解大多数的哮喘患者的临床症状,而一些经历持续不缓解的临床症状及肺功能进行性下降的哮喘被称为不可逆或难治性哮喘,对于这类患者目前尚缺少有效的治疗措施。气道重塑是哮喘的主要特征之一,这种重塑过程是严重哮喘的一个关键特征,被认为在难治性或持续性哮喘的发生发展中起到关键的作用。因此针对哮喘气道重塑机制的研究及针对气道重塑的各种组成部分的生物制剂的开发对于哮喘,尤其是难治性哮喘尤为必要。目前的动物模型、体外研究和一些临床研究已经提出了关于气道重塑中涉及的细胞和分子途径,这些途径的研究对于针对气道重塑的各类生物制剂的开发起到关键的作用,进而限制哮喘患者的气道重塑的发生,向哮喘的治愈迈了更近一步。结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor,CTGF）是富含半胱氨酸的分泌肽。CTGF在OVA诱导的哮喘小鼠的肺组织中表达显着升高,同时与MMP-9、TIMP-1及平滑肌层的厚度呈正向相关,上述发现提示在哮喘气道重塑的发病机制中CTGF可能参与其中。进一步的研究发现在评估持续性气道阻塞程度时,血浆CTGF可能是稳定性哮喘的潜在生物标志物,CTGF可能与哮喘气道重塑有关。卵泡抑素样蛋白1（Follistatin-Like 1,Fstl1）属于卵泡抑素蛋白家族,它是一种细胞外基质的糖蛋白,属于分泌型蛋白,对于血管平滑肌细胞的增殖和迁移起到抑制作用,能够改善内皮细胞的功能,促进血管的再形成,在胚胎发育、器官形成、肿瘤、炎症反应中起到重要作用,同时对于心肌也能够起到保护作用。在哮喘气道重塑的发生发展中气道平滑肌细胞的异常增殖与迁移也起到重要的作用,它可以导致气道高反应性的发生,而研究已经证实在人气道平滑肌细胞的增殖与迁移过程中Fstl1起到重要的促进作用。在患有严重哮喘的患者的肺中,Fstl1被巨噬细胞高度表达,而敲除Fstl1能够抑制平滑肌细胞的迁移,提示在支气管哮喘的气道重塑的治疗研究中Fstl1可能代表了一个新的靶点。断开的相互作用蛋白 2 同源物 A（Disconnected（disco）-interacting protein 2 homolog A,DIP2A）是一种细胞质蛋白,DIP2A与FSTL1之间的直接物理相互作用已经被免疫共沉淀测定所证实,DIP2A作为FSTL1的受体介导FSTL1的下游信号通路。转化生长因子-β（Transforming growth factor beta,TGF-β）可以影响多种细胞的生长和分化,参与细胞的凋亡、免疫调节反应,并在上述过程中起到重要的作用。研究发现TGF-β的表达量在哮喘患者的气道组织中显着增加。TGF-β的许多作用由CTGF介导,CTGF是与TGF-β有关的关键的促纤维化因子之一。TGF-β是主要的组织纤维化的中心介质,而Fstl1则是在肺组织纤维化过程中重要的纤维前糖类蛋白,主要通过TGF-β信号通路促进纤维化。在肺成纤维细胞中TGF-β能诱导Fstl1生成,在小鼠肺纤维化过程中TGF-β上调Fstl1的表达。TGF-β的许多作用由CTGF介导,之前的研究已经明确FSTL1、CTGF均可以促进气道重塑,但是其具体作用机制尚不清楚。本研究以CTGF及FSTL1为切入点,旨在阐明其导致哮喘气道重塑的具体机制,为早期防治哮喘病人固定性气流受限提供临床治疗思路。研究目的探究CTGF是否通过影响FSTL1/DIP2A信号通路促进哮喘气道重塑的发生。研究方法1.明确CTGF及FSTL1在OVA诱导的小鼠过敏性气道疾病模型中起到重塑的作用。1.1采用6-8周雌性BALB/C小鼠,给予OVA诱导小鼠过敏性气道疾病模型,主要采用腹腔注射致敏和滴鼻吸入局部激发的方式。1.2造模成功后对各组小鼠进行气道反应性测定,给予不同浓度的乙酰甲胆碱雾化吸入测定并记录吸入后的气道阻力。1.3肺功能检测后处死并收集哮喘模型组及对照组小鼠的肺泡灌洗液、血液及肺组织标本。1.4对各组小鼠的肺泡灌洗液进行细胞的分类及计数。1.5测定各组小鼠外周血中IgE的浓度水平。1.6采用HE染色法分析气道重塑的特征性表现,包括气道上皮细胞的脱落、平滑肌束的增加以及基底膜增厚等。1.7采用Masson染色法分析小鼠气道中胶原纤维含量的表达。1.8应用免疫组织化学染色法测定各组CTGF、FSTL1的表达情况,同时测定起到重塑作用的相关标志物a平滑肌动蛋白（a-smooth muscle actin,a-SMA）、纤连蛋白及Ⅰ型胶原的表达。1.9应用Western blot方法测定CTGF、FSTL1及其受体DIP2A以及重塑相关蛋白的表达。1.10应用实时定量聚合酶链反应qRT-PCR方法检测CTGF、FSTL1及其受体DIP2A以及重塑相关标志物mRNA的表达。2.细胞水平观察CTGF对FSTL1/DIP2A信号通路的影响。2.1体外培养人肺成纤维细胞,给予FSTL1重组蛋白刺激后,检测DIP2A、a-SMA、纤连蛋白及Ⅰ型胶原的表达。2.2体外培养人肺成纤维细胞,给予CTGF重组蛋白刺激后,检测FSTL1、DIP2A、a-SMA、纤连蛋白及Ⅰ型胶原的表达。2.3体外培养人肺成纤维细胞,转染FSTL1 siRNA后给予CTGF重组蛋白处理,检测FSTL1、DIP2A、a-SMA、纤连蛋白及Ⅰ型胶原的表达。2.4体外培养人肺成纤维细胞,转染DIP2A siRNA后给予CTGF重组蛋白刺激后,检测FSTL1、DIP2A、a-SMA、纤连蛋白及Ⅰ型胶原的表达。2.5体外培养人肺成纤维细胞,转染DIP2A siRNA后给予FSTL1重组蛋白刺激后,检测CTGF、a-SMA、纤连蛋白及Ⅰ型胶原的表达。3.体内干预CTGF的表达对于哮喘小鼠FSTL1和气道重塑的影响。3.1采用6-8周雌性BALB/C小鼠,随机分为WT组、WT+OVA组、WT+OVA+Dex组、WT+OVA+CTGF组,WT+OVA组采用第一部分所描述的方法进行OVA哮喘小鼠模型制备,WT+OVA+Dex组在WT+OVA组模型制备的基础上腹腔注射地塞米松,WT+OVA+CTGF组在WT+OVA组模型制备的基础上滴鼻CTGF重组蛋白。3.2造模成功后对各组小鼠进行气道反应性的测定,测定并记录不同浓度下乙酰甲胆碱雾化吸入后的气道阻力。3.3肺功能检测结束后处死并收集各组小鼠的肺组织标本。3.4采用HE染色法观察各组小鼠的气道重塑的特征,包括上皮细胞的脱落、平滑肌束的增加及基底膜增厚等。3.5应用免疫组织化学法测定各组小鼠FSTL1的表达,同时测定起到重塑相关标志物a-SMA、纤连蛋白及Ⅰ型胶原的表达。3.6应用Western blot方法测定各组小鼠的FSTL1以及重塑相关标志物蛋白的表达。3.7应用实时定量聚合酶链反应qRT-PCR法检测各组小鼠的FSTL1以及重塑相关标志物mRNA的含量。结果1.哮喘小鼠模型的气道重塑表现明显,且CTGF、FSTL1含量增高。1.1 OVA诱导的哮喘小鼠模型组较对照组气道反应性增高。1.2 OVA诱导的哮喘小鼠模型组较对照组小鼠的肺泡灌洗液沉渣中总细胞数增多、中性粒细胞数增多及嗜酸性粒细胞数增多。1.3 OVA诱导的哮喘小鼠模型组较对照组小鼠血浆中IgE水平明显升高。1.4 HE染色显示哮喘小鼠模型组表现为上皮细胞的脱落、平滑肌束的增加以及基底膜增厚等气道重塑的表现。1.5 Masson染色显示哮喘小鼠模型组气道中胶原纤维含量明显增加。1.6免疫组织化学染色表明哮喘小鼠模型组气道中CTGF、FSTL1含量增加,且重塑相关标志物的含量也增加。1.7 Western blot显示哮喘小鼠模型组肺组织中CTGF、FSTL1及其受体DIP2A高表达,同时伴随重塑相关标志物的高表达。1.8 qRT-PCR显示哮喘小鼠模型组肺组织中CTGF、FSTL1及其受体DIP2A的mRNA高表达,同时伴随重塑相关标志物的高表达。2.CTGF通过FSTL1/DIP2A信号通路促进气道重塑。2.1 Western blot显示FSTL1重组蛋白刺激人肺成纤维细胞后其受体DIP2A蛋白高表达,同时伴随重塑相关标志物的高表达。与对照组相比,FSTL1重组蛋白刺激组FSTL1的受体DIP2A蛋白表达增高,同时重塑相关标志物的表达也增高（p<0.05）,具有统计学差异。2.2 Western blot显示CTGF重组蛋白刺激人肺成纤维细胞后FSTL1及其受体DIP2A蛋白高表达,同时伴随重塑相关标志物的高表达。与对照组相比,CTGF重组蛋白刺激组FSTL1及其受体DIP2A蛋白表达增高,同时重塑相关标志物的表达也增高（p<0.05）,具有统计学差异。2.3人肺成纤维细胞转染FSTL1 siRNA后给予CTGF重组蛋白处理,Western blot显示CTGF重组蛋白刺激阴性对照组人肺成纤维细胞后FSTL1、DIP2A及重塑相关标志物的表达较未经CTGF刺激的阴性对照组明显增高,且具有统计学差异（p<0.05）。CTGF重组蛋白刺激转染FSTL1 siRNA的人肺成纤维细胞后FSTL1、DIP2A及重塑相关标志物的表达较CTGF重组蛋白刺激阴性对照组显着减低,且有统计学差异（p<0.05）。CTGF重组蛋白刺激转染FSTL1 siRNA的人肺成纤维细胞后FSTL1、DIP2A及重塑相关标志物的表达较未经CTGF重组蛋白刺激转染FSTL1 siRNA的人肺成纤维细胞组表达无明显差异。（p>0.05）。提示予以CTGF重组蛋白刺激肺成纤维细胞后FSTL1、受体DIP2A、重塑标记物的表达均升高,阻断FSTL1后,FSTL1、受体DIP2A、重塑标记物的受到影响,未见升高。2.4人肺成纤维细胞转染DIP2A siRNA后给予CTGF重组蛋白处理,Western blot显示CTGF重组蛋白刺激阴性对照组人肺成纤维细胞后FSTL1、DIP2A及重塑相关标志物的表达较未经CTGF刺激的阴性对照组明显增高,且具有统计学差异（p<0.05）。CTGF重组蛋白刺激转染DIP2A siRNA的人肺成纤维细胞后DIP2A及重塑相关标志物的表达较CTGF重组蛋白刺激阴性对照组明显减低,且具有统计学差异（p<0.05）,而FSTL1的表达基本不变,（p>0.05）。CTGF重组蛋白刺激转染DIP2A siRNA的人肺成纤维细胞后DIP2A及重塑相关标志物的表达较未经CTGF重组蛋白刺激转染DIP2A siRNA的人肺成纤维细胞组表达无明显差异,（p>0.05）,而FSTL1的表达明显升高,（p<0.05）。2.5人肺成纤维细胞转染DIP2A siRNA后给予FSTL1重组蛋白处理,Western blot显示FSTL1重组蛋白刺激阴性对照组人肺成纤维细胞后重塑相关标志物的表达较未经FSTL1刺激的阴性对照组明显增高,且具有统计学差异（p<0.05）,而CTGF的表达基本不变,（p>0.05）。FSTL1重组蛋白刺激转染DIP2A siRNA的人肺成纤维细胞后重塑相关标志物的表达较FSTL1重组蛋白刺激阴性对照组明显减低,且具有统计学差异（p<0.05）,而CTGF的表达基本不变,（p>0.05）。FSTL1重组蛋白刺激转染DIP2A siRNA的人肺成纤维细胞后重塑相关标志物的表达较未经FSTL1重组蛋白刺激转染DIP2A siRNA的人肺成纤维细胞组表达无明显差异（p>0.05）,而CTGF的表达基本不变,（p>0.05）。3.体内干预CTGF的表达后哮喘小鼠FSTL1和气道重塑受到影响。3.1给予乙酰甲胆碱雾化吸入后,WT+OVA组较WT组的气道阻力增加,WT+OVA+Dex组较WT+OVA组气道阻力减低,WT+OVA+CTGF组较WT+OVA组气道阻力增加。3.2 HE染色显示WT+OVA组小鼠模型组表现为上皮细胞脱落、平滑肌束增加以及基底膜增厚等气道重塑表现。WT+OVA+Dex组较WT+OVA组小鼠气道炎症及重塑减轻。WT+OVA+CTGF组较WT+OVA组小鼠气道炎症及重塑加重。3.3免疫组化显示WT+OVA组较WT组的FSTL1、重塑相关标志物增加,WT+OVA+Dex组较WT+OVA组的FSTL1、重塑相关标志物表达减低,WT+OVA+CTGF组较WT+OVA组的FSTL1、重塑相关标志物表达增加。3.4 Western blot显示WT+OVA组较WT组的FSTL1、重塑相关标志物表达增加,WT+OVA+Dex组较WT+OVA组的FSTL1、重塑相关标志物表达减低,WT+OVA+CTGF组较WT+OVA组的FSTL1、重塑相关标志物表达增加。3.5 qRT-PCR显示WT+OVA组较WT组的FSTL1、重塑相关标志物表达增加,WT+OVA+Dex组较WT+OVA组的FSTL1、重塑相关标志物表达减低,WT+OVA+CTGF组较WT+OVA组的FSTL1、重塑相关标志物表达增加。结论CTGF通过影响FSTL1/DIP2A信号通路促进哮喘气道重塑的发生。
余其梅[4]（2020）在《结缔组织生长因子抗体在石英粉尘致大鼠肺部纤维化过程中的作用》文中进行了进一步梳理目的:矽肺病是长期吸入石英粉尘所引起的一种以肺部炎症、弥漫性纤维化为特征的慢性疾病,这种疾病会降低患者的肺功能,严重影响患者的生活质量。目前关于矽肺的发生机制尚未完全阐明,但炎症-上皮间质化（EMT）-纤维化过程在矽肺的发生发展中具有重要的作用。研究显示,结缔组织生长因子（CTGF）既具有促进炎症的作用,也能协同TGF-β参与纤维化的发展,但其在石英诱导肺部炎症及纤维化过程中的作用尚不清楚。因此,本研究主要探讨CTGF抗体在石英诱导肺部纤维化的发生和发展过程中的作用,重点分析抑制CTGF的水平对石英引起的肺部炎症、EMT以及纤维化程度的影响及其可能机制。方法:采用单次气管内滴注石英粉尘建立大鼠矽肺模型,腹腔注射CTGF抗体构建CTGF中和效应模型。将192只Wistar大鼠随机分为6组,即空白对照组、生理盐水组、石英组、试剂对照Ig G组、石英+Ig G组、石英+anti-CTGF组,每组32只;气管内滴注1ml生理盐水或50mg（50mg/ml,1ml）石英粉尘后给予腹腔注射Ig G或CTGF抗体。手术完成后正常饲养,于染尘后1天、7天、28天、84天处死,收集右肺中叶组织进行HE、Masson染色,观察各组别大鼠肺部病理变化和胶原纤维沉积情况并进行病理评分;收集肺泡灌洗液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定其中炎性细胞因子CTGF、IL-1β、TGF-β的表达水平;取剩下的肺组织提取总蛋白,Western bloting实验检测肺组织内E-cadherin、p120ctn及Rho A等蛋白表达水平。结果:（1）HE、Masson的结果显示,石英粉尘暴露7天后,石英组大鼠肺泡间隔出现断裂,肺泡壁明显增厚,组织内炎症浸润严重,出现大量细胞性结节,与生理盐水组相比未见明显异常纤维化改变;腹腔注射CTGF抗体或Ig G后肺组织内炎性浸润程度及细胞性结节大小较单纯石英染尘组均明显降低。石英粉尘暴露28和84天后,石英组大鼠肺组织内的炎症浸润程度低于第7天的石英组,但细胞性结节周围出现胶原样改变,肺组织气管周围胶原纤维沉积逐渐累积,较7天组显着增加;腹腔注射Ig G抗体后炎症浸润程度及肺组织胶原纤维沉积与单纯石英染尘组相当,腹腔注射CTGF抗体后,细胞性结节的大小和肺组织胶原沉积较石英+Ig G组显着降低。炎性和纤维化反应评分结果显示,腹腔注射Ig G抗体7天后,肺部炎性反应较石英单纯染尘组显着降低（P<0.05）,腹腔注射CTGF抗体7、28、84天后,肺部炎性反应程度相对于同时间点的石英单纯染尘组显着降低（P<0.05）。腹腔注射CTGF抗体28和84天后,石英+anti-CTGF组肺部纤维化反应程度显着降低,明显低于石英组（P<0.05）。（2）ELISA结果显示,石英粉尘暴露后,石英组和石英+Ig G组大鼠肺泡灌洗液中TGF-β的表达在第84天均显着升高（P<0.05）,腹腔注射CTGF抗体后能显着抑制TGF-β的表达,与石英+Ig G组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）Western blot结果显示,石英粉尘暴露7天后,石英组p120ctn亚型Ⅰ和Ⅲ及Rho A蛋白表达较生理盐水组显着上调（P<0.05）,腹腔注射CTGF抗体或Ig G7天后,石英+Ig G组和石英+anti-CTGF组的p120ctn亚型Ⅰ和Ⅲ,石英+anti-CTGF组Rho A较石英单纯染尘组显着下调（P<0.05）;石英粉尘暴露28天后,石英组E-cadherin蛋白和p120ctn亚型Ⅰ和Ⅲ的表达显着下调（P<0.05）,腹腔注射CTGF抗体后,E-cadherin蛋白、p120ctn蛋白亚型Ⅰ和Rho A显着上调（P<0.05）,且恢复到生理盐水组水平;染尘84天后,石英组、石英+Ig G组、石英+anti-CTGF组p120ctn亚型Ⅰ和亚型Ⅲ蛋白均显着低于生理盐水组（P<0.05）,腹腔注射CTGF抗体和Ig G 84天后较石英组无明显改变。结论:（1）在石英诱导的肺部炎症和纤维化过程中,CTGF抗体发挥了积极的作用,阻断CTGF可以显着抑制肺部炎性及纤维化反应程度。并且在石英粉尘暴露后84天,CTGF抗体能通过抑制TGF-β的表达减弱石英诱导的大鼠肺部纤维化反应。（2）石英染尘后第28天大鼠肺部E-cadherin、p120ctn亚型Ⅰ和Ⅲ的表达显着降低,发生上皮间质化EMT改变,给予CTGF抗体后可明显上调肺部E-cadherin、p120ctn亚型Ⅰ和Rho A的表达水平,可明显抑制石英粉尘诱导EMT的发生和发展。
李雪如[5]（2020）在《S58通过激活PI3k/Akt/Nrf2信号通路抑制兔青光眼滤过性手术术后纤维化》文中研究说明背景:青光眼滤过性手术（Glaucoma filtration surgery,GFS）是目前临床治疗青光眼眼压（intraocular pressure,IOP）控制不佳的有效方法,但术后结膜囊瘢痕的发生常导致手术失败。尽管,临床上5-氟脲嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）、丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）能提高了滤过性手术的成功率,但仍存在一些严重并发症,例如滤过泡的渗漏、术后浅前房以及角膜毒性等。因此,寻求一种有效且安全的抗瘢痕药物仍是目前研究的重点。有文献指出氧化与抗氧化平衡通过不同的途径调节TGF-bs诱导的纤维化,并表明氧化应激的增加对纤维化疾病的发展至关重要。因此,针对TGF-bs诱导的和ROS依赖的细胞氧化应激反应,可能为纤维化疾病的治疗提供新的方法。在前期研究中,本课题组利用指数式富集的配基系统进化（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX）技术,筛选并优化出具有靶向TbR II、无毒性、易化学修饰的核酸适配子S58。S58阻抑TGF-b2与其受体结合是否能够改善细胞内应激水平,调节氧化-抗氧化失衡抑制青光眼滤过性手术术后瘢痕仍有待进一步阐述。目的:本研究拟通过在体内/外的实验验证靶向TbR II的核酸适配子S58阻抑TGF-b2促纤维化的生物学作用,并进一步研究S58改善受损结膜囊成纤维细胞内氧化-抗氧化稳态抑制青光眼滤过性手术术后瘢痕的作用机制。方法:（一）体外实验部分:原代人结膜囊成纤维细胞（Human Conjunctival Fibroblasts,HConFs）用于细胞实验。1.运用软件建立核酸适配子S58的三维模型,构建S58与TbR II胞外段的三维晶体结构,然后对S58和TbR II进行半柔性分子对接,统计分析S58和TbR II的结合情况,并确定其结合位点。2.流式细胞仪技术检测和激光共聚焦显微镜观察荧光标记后的核酸适子S58与成纤维细胞的结合情况,并利用siRNA-TbR II敲低实验来验证S58靶向TbR II抗TGF-b2诱导的纤维化。3.不同浓度的TGF-b2（0、1、2、4、10、20 ng/m1）处理HConFs细胞24 h,或HConFs在TGF-b2（4 ng/m1）诱导不同时间（0、24、48、72 h）后,应用Western blot或RT-PCR检测细胞纤维化相关蛋白或基因的表达;共聚焦细胞免疫荧光技术检测α-SMA表达水平。4.NAC处理TGF-b2（4 ng/m1）诱导的HConFs 24h,应用Western blot或RT-PCR检测细胞纤维化和相关抗氧化蛋白或基因的表达;共聚焦细胞免疫荧光技术检测α-SMA、collagen-1表达水平。5.S58处理TGF-b2（4 ng/m1）诱导的HConFs 24h,应用Western blot或RT-PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction）检测相关抗氧化蛋白或基因的表达;流式细胞仪技术检测细胞内ROS水平。6.S58处理TGF-b2（4 ng/m1）诱导的HConFs 24h,应用Western blot或RT-PCR检测细胞纤维化相关蛋白或基因的表达;共聚焦细胞免疫荧光技术检测α-SMA、collagen-1、fibronectin表达水平,划痕实验和CCK-8实验用于评价S58对TGF-b2诱导的HConFs增殖和迁移的影响。7.利用siRNA-Nrf2的基因敲除或LY294002对PI3K/Akt的抑制,通过应用Western blot和共聚焦细胞免疫荧光技术检测细胞纤维化相关蛋白的表达,来验证S58对TGF-b2诱导的HConFs抗纤维化影响;（二）动物实验部分:以新西兰兔眼青光眼滤过性手为模型,研究S58抑制术后滤过泡纤维化的治疗效果。1.制作新西兰兔青光眼滤过性手术模型,实验分组分别为:Normal组;Sham组;S58组:S58 20nM/drop（4次/天）;MMC组:MMC（0.2mg/m1）。2.分别于术后3 d、1 w、2 w、4 w观察兔子眼滤过泡的形态,裂隙灯下观察并拍照记录以及测量IOP变化。3.病理组织石蜡切片及H&E、Masson、天狼猩红染色分析。结果:1.S58能够通过增加TGF-b2与TbR II结合位阻来抑制TGF-b2诱导的HConFs纤维化。2.TGF-b2诱导HConFs细胞内氧化应激反应和增加纤维化水平。3.TGF-b2增加HConFs氧化应激和诱导纤维化。4.NAC通过抑制ROS的产生降低TGF-b2诱导的HConFs纤维化,提示ROS在TGF-b2诱导HConFs纤维化中扮演着重要的角色。5.S58促进TGF-b2诱导的HConFs抗氧化防御能力。6.S58减少TGF-b2诱导的HConFs纤维化。7.S58逆转TGF-b2诱导的HConFs纤维化通过激活PI3k/Akt/Nrf2信号通路。8.以青光眼滤过性手术的新西兰兔为模型,S58可有效降低滤过性手术术后滤过泡的纤维化程度而延长滤过泡存在时间。结论:本研究提示S5（23）可通过激活细胞内抗氧化防御PI3k/Akt/Nrf2信号通路改善青光眼滤过性手术预后。
康欣[6]（2020）在《吡非尼酮通过影响TGF-β1表达抑制兔眼小梁切除术后瘢痕形成的实验研究》文中进行了进一步梳理目的将不同浓度吡非尼酮（Pirfenidone,PFD）用于兔眼小梁切除术后,通过测量术后眼压、观察功能性滤过泡存活情况和眼部毒副作用、滤过道中TGF-β1和其调控的α-SMA、Collagen I及PCNA阳性细胞数情况的比较,探究其能否用于抑制滤过术后瘢痕的形成,并寻找随着浓度变化抑制作用的规律,进一步阐明其可能的作用机制。方法选取健康成年家兔40只（40眼）,雌雄不限,体重2.0～2.5kg随机分为五组,一组对照组和四组实验组,每组8只（8眼）,右眼作为手术眼,测量术眼基础眼压后均行小梁切除术,术后1次/天,连续7天避开手术区域对各实验组结膜下注射浓度分为别1.0g/L、3.0g/L、5.0g/L、10.0g/L的PFD 0.1m L,对照组结膜下注射无菌水0.1m L。分别于术后1、7、14、21、28天用Schiotz眼压计测量术眼眼压（mm Hg）,记录功能性滤过泡存活情况,观察眼部毒副作用。于术后14、28天空气栓塞法各组随机抽取实验动物4只（4眼）处死,分离眼周组织,完整取下眼球,取滤过道制作病理标本,采用HE染色、免疫组织法检测术后各时间点滤过区纤维增生及TGF-β1、α-SMA、PCNA及Collagen I与对照组相比阳性细胞数情况。所有数据均采用spss26.0进行统计分析。结果（1）术后1天,各实验组较对照组眼压无显着性差异（P>0.05）,术后7、14、21、28天实验组（3.0g/L、5.0g/L、10.0g/L PFD）较对照组眼压均低差异有统计学意义（P<0.05）,而实验组（1.0g/L PFD）较对照组眼压低仅在术后7天差异有统计学意义（P<0.05）。（2）各实验组术后出现轻度前房闪辉、球结膜轻度充血伴少量分泌物出现例数与对照组无明显差别且均于术后7天内消失;各组均未发现滤过泡渗漏、晶状体混浊、角膜水肿等眼部损害的现象。（3）术后1天,各组均形成功能性滤过泡形成率并无差异,术后7、14天、21、28天实验组（3.0g/L、5.0g/L、10.0g/L PFD）组较对照组功能性滤过泡形成率高,差异均有统计学意义（P<0.05）,实验组1.0g/L PFD较对照组仅在术后7天滤过泡形成率高,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）HE染色结果显示术后14、28天,实验组（3.0g/L、5.0g/L、10.0g/L PFD）各组成纤维细胞数均少于对照组差异有统计学意义,但1.0g/L和对照组成纤维细胞数差异无统计学意义（P>0.05）。（5）免疫组化染色结果显示术后14、28天,实验组（3.0g/L、5.0g/L、10.0g/L PFD）各组滤过道TGF-β1、α-SMA、Collagen I及PCNA阳性细胞数均少于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,且随着实验组浓度的增加滤过道TGF-β1、α-SMA、Collagen I及PCNA阳性细胞数减少,差异有统计学意义（P<0.05）。术后14天、28天,实验组（1.0g/L PFD）滤过区各因子阳性细胞数与对照组无显着性差异（P>0.05）。结论（1）3.0g/L、5.0g/L、10.0g/L PFD在兔眼滤过术后具有抗瘢痕形成的作用且毒副作用小,1.0g/L PFD虽有一定的降眼压及抗增殖效应但维持时间较短,根据本实验结果认为PFD的应用于滤过术后起效浓度为3.0g/L,但其最适浓度有待进一步研究。（2）PFD能够通过抑制TGF-β1及其调控的α-SMA、Collagen I及PCNA的表达来抑制兔滤过术后成纤维细胞、肌成纤维细胞增殖及I型胶原纤维的增生,从而抑制术后滤过道瘢痕化,抑制作用随着浓度升高而增强。
卢松芳[7]（2020）在《Yap通过细胞外基质力学正反馈调控成纤维细胞活化的研究》文中提出研究目的1.探讨Yap在小鼠单侧肾脏缺血再灌注损伤（Unilateral Ischemic reperfusion injury,UIRI）导致肾纤维化的模型中的表达;2.细胞水平探讨Yap基因对肾成纤维细胞活化和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）蛋白表达的影响;3.探讨不同刚度的聚丙烯酰胺水凝胶（Polyacrylamide hydrogel,PAHG）对成纤维细胞Yap、肌成纤维细胞标记蛋白SMA-α、ECM蛋白表达的影响;4.探讨CTGF基因对成纤维细胞活化和Yap、ECM蛋白表达的影响,明确Yap/CTGF通路是否调控肾成纤维细胞的活化。研究方法1.清洁级雄性野生型C57/B6小鼠随机分为3组,每组6只。手术组用微型血管夹阻断左侧肾脏血流45min,分别在术后1周和4周收集肾脏,假手术组4周收集肾脏。PAS、HE化学染色检测肾脏组织结构,PASM、Masson染色检测胶原蛋白,免疫组织化学染色和WB（western blot）检测肾脏组织Yap、CTGF、SMA-α、Fn、Col 1蛋白表达水平。2.分离肾成纤维细胞体外培养,WB检测TGF-β1诱导成纤维细胞活化后Yap、CTGF、SMA-α、Fn、Col 1蛋白表达水平;慢病毒过表达载体Yap（5SA）和敲除载体sg-Yap分别转染成纤维细胞,WB检测CTGF、SMA-α、Fn、Col 1蛋白表达水平。采用不同verteporfin浓度来抑制Yap转录功能,WB检测CTGF、SMA-α、Fn、Col 1蛋白以及细胞凋亡标记物caspase3、cleaved caspase蛋白表达水平;利用慢病毒载体TEAD（Δ289）-Myc转染成纤维细胞来阻断Yap与TEAD结合,TGF-β1（4ng/ml）诱导成纤维细胞24h,WB检测CTGF、SMA-α、Col 1蛋白表达水平。3.通过改变双丙烯酰胺和丙烯酰胺配比浓度来调节水凝胶的模量,制作不同刚度的基质水凝胶培养成纤维细胞,WB检测Yap、CTGF、SMA-α、Fn、Col 1蛋白表达水平;免疫荧光染色检测F-actin、SMA-α、Yap的表达定位。对不同刚度基质上培养的成纤维细胞,采用sg-Yap、TEAD（Δ289）-Myc和verteporfin来抑制Yap表达后,WB检测Yap、CTGF、SMA-α、Fn、Col 1表达。4.外源性CTGF（50μg/ml）孵育在不同刚度基质上培养的成纤维细胞,显微镜观察细胞生长形态;不同CTGF浓度孵育成纤维细胞以及慢病毒敲除载体sg-CTGF转染成纤维细胞,WB检测Yap、SMA-α、Col 1蛋白表达水平。研究结果1.Yap在小鼠单侧肾脏缺血再灌注损伤模型中表达UIRI手术组4周后肾脏病理结果显示:肾脏结构紊乱,肾小管数量减少,管腔扩张、变形,小管上皮细胞萎缩,肾间质增宽、大量细胞浸润、胶原沉积;WB检测结果显示:UIRI肾组织中Yap及其靶蛋白CTGF、肌成纤维细胞标记蛋白SMA-α、ECM蛋白Fn和Col 1的表达增加,以4周组最明显,与假手术组相比差异具有统计学意义（P<0.05）;免疫组织化学染色显示:UIRI 4周组肾间质中有SMA-α和FSP-1表达阳性的肌成纤维细胞浸润,Fn和Col 1表达增加,Yap在肾间质细胞及肾小管上皮细胞内强阳性表达,主要位于细胞核内。2.Yap对肾成纤维细胞活化和ECM蛋白表达的影响TGF-β1诱导肾成纤维细胞活化后,SMA-α、Fn、Col 1、Yap及CTGF的蛋白表达显着增加,并具有浓度梯度依赖性;过表达Yap（5SA）可诱导成纤维细胞活化上调SMA-α、CTGF、Col 1蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;利用sg-Yap敲除成纤维细胞中Yap基因后,SMA-α、CTGF、Fn和Col 1的表达明显降低,与TGF-β1刺激组相比差异有统计学意义（P<0.05）;分别采用慢病毒TEAD（Δ289）-Myc质粒及药物verteporfin抑制Yap信号,均能显着抑制在TGF-β1作用下SMA-α、CTGF、Fn和Col 1的蛋白表达,与单纯TGF-β1组比较差异有统计学意义（P<0.05）。3.细胞外基质刚度对成纤维细胞活化和Yap表达的影响显微镜下结果显示:硬基质（50k Pa）促进细胞快速生长增殖,细胞伸出伪足呈星形,软基质（0.5k Pa）细胞呈圆形、团簇状,易脱落,生长增殖受限。免疫荧光结果显示:在软基质中成纤维细胞SMA-α呈阴性表达,不产生丝状应力纤维,Yap表达位于细胞质;在硬基质SMA-α表达阳性,Yap大量表达于细胞核内。WB结果显示:随着凝胶基质刚度增大,成纤维细胞活化作用越明显,表达Yap、CTGF、Col 1、SMA-α蛋白增加,刚度达到50k Pa时作用最强。敲除sg-Yap基因阻断了硬基质对成纤维细胞的活化作用,蛋白Col 1、CTGF、SMA-α的表达减少,与硬基质对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）;同样,TEAD（Δ289）-Myc和verteporfin抑制Yap信号也阻断了硬基质对成纤维细胞的激活作用,SMA-α、CTGF、Fn的表达减少,与硬基质对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。高硬度基质激活Yap表达、促进成纤维细胞活化以及ECM蛋白表达,抑制Yap信号能阻断高硬度基质对成纤维细胞的活化作用。4.CTGF对肾成纤维细胞活化和ECM蛋白表达的影响外源性CTGF能明显促进软基质培养的成纤维细胞增殖生长;CTGF诱导成纤维细胞Yap、SMA-α、Col 1蛋白表达增加,并随着CTGF浓度的提高蛋白表达增加;敲除CTGF基因（sg-CTGF）阻断了TGF-β1对成纤维细胞的促纤维化效应,蛋白Yap、SMA-α、Fn、Col 1的表达减少,与TGF-β1组相比差异有统计学意义（P<0.05）。CTGF调控成纤维细胞的活化。结论Yap激活促进成纤维细胞的活化和ECM蛋白合成;而抑制Yap表达阻断了细胞外基质力学对成纤维细胞的活化作用;敲除Yap的下游CTGF抑制了TGF-β1对成纤维细胞的活化作用。因此,通过干预Yap信号来调控成纤维细胞的活化、增殖、合成,将会给抗肾脏纤维化的治疗提供新的思路。
胡长清[8]（2020）在《ADAMTS16通过激活TGF-β1调控心肌纤维化和心功能障碍》文中指出心力衰竭（heart failure,HF）,以下简称心衰,发生于心脏疾病的终末阶段,具有极高的发病率和死亡率。心肌纤维化是心衰的重要原因,然而临床上治疗心肌纤维化的效果却十分有限。心肌纤维化是一种瘢痕形成的过程,其主要特点是成纤维细胞的异常增殖和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）蛋白的过度沉积,从而导致心脏结构和功能的异常。ECM中积聚的胶原蛋白会导致心脏左心室的顺应性降低和僵硬度的增加,同时会诱导心肌细胞内的病理性信号传导,最终导致心衰。过度累积的ECM也会损害心肌细胞间的电活动,增加心律失常的风险。心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）和肌成纤维细胞（myofibroblasts,MFs）是ECM的主要来源。CFs的表型转化受到严格的调控,是心脏维持稳态的重要基础。多数心脏类疾病与心肌纤维化有关。转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）信号通路在心肌纤维化和心衰的发生发展进程中扮演着重要角色,它们通过通过自分泌或旁分泌的方式参与信号传递。在许多组织中,TGF-β1的持续产生是纤维化发生的基础。TGF-β1信号通路的激活依赖于成熟TGF-β1的释放。通常TGF-β1均以无活性的LAP-TGF-β1复合物形式存在。该复合物包含前体TGF-β潜在相关蛋白（latency associated protein,LAP）和活性TGF-β1部分。生理条件下,TGF-β1活性受到严格调控。血小板反应蛋白1（TSP1）是TGF-β1最重要的活化因子之一。研究发现TSP1蛋白的KRFK基序可以与LAP蛋白的LSKL基序结合,从而改变复合物的空间构象,使TGF-β1和LAP蛋白发生分离,暴露出下游受体TβRⅠ/TβRⅡ结合位点,激活下游Smad蛋白,将胞外信号传递至细胞核内。在心肌纤维化的过程中,TGF-β1信号通路参与到了成纤维细胞的表型转化。研究表明,TGF-β1刺激诱发CFs向MFs的表型转化,增加细胞外基质蛋白质合成。同时TGF-β1通过抑制基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）的活性和促进PAI-1、TIMPs等蛋白酶抑制剂的合成,导致ECM的过度沉积。血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶家族（ADAMTS）是一组多功能蛋白酶,在结构上与ADAMs家族相关联。具有典型的金属蛋白酶活性,能降解ECM中的关键蛋白,对形态发生、组织修复过程中涉及的软骨基质重塑起到重要作用。ADAMTS16是ADAMTS成员之一。ADAMTS16能够对α2巨球蛋白（α2-macroglobulin）进行切割,提示ADAMTS16具有潜在的蛋白酶活性。ADAMTS16突变大鼠中,与对照组大鼠相比,血压降低36 mm Hg,主动脉脉搏波速度和血管中膜厚度明显降低。提示ADAMTS16对心血管疾病的发生有重要的调控作用。TSP1蛋白通过KRFK基序和Wxx W基序（WSPW,WSHW,WGPW）与LAP-TGF-β1结合,从而激活LAP-TGF-β1。在ADAMTS16蛋白序列中,我们也发现了与Wxx W类似的基序。同时在ADAMTS16序列中没有找到KRFK基序,但是发现了一个与KRFK基序带有相同电荷的RRFR序列,因此我们提出假说:ADAMTS16可能通过RRFR和Wxx W基序与LAP-TGF-β1形成互作;同时TGF-β1是心血管疾病中最重要的促纤维化生长因子,ADAMTS16可能通过激活LAP-TGF-β1,参与心肌纤维化过程的调节。本文以ADAMTS16为研究对象,在细胞和模式动物水平探讨了其在心肌纤维化中的调控作用。主动脉弓缩窄（transverse aortic constriction,TAC）手术可造成主动脉狭窄,引起左心室压力增加,最终导致慢性心衰。首先我们发现ADAMTS16蛋白TAC手术诱导的小鼠心衰模型中表达量显着升高,并且其m RNA表达水平和心肌纤维化标志物MMP2、MMP9、Col1a1和Col3a1表达成正相关,提示ADAMTS16可能与心肌纤维化过程紧密关联。在CFs中,ADAMTS16能促进MFs分子标志物α-SMA的表达,同时增强CFs的收缩和迁移能力,表明ADAMTS16促进了CFs向MFs的表型转化。在ADAMTS16蛋白结构分析中,我们发现RRFR和Wxx W基序与可以同LAP-TGF-β1结合的TSP1蛋白同源性很高。免疫共沉淀（Co-IP）实验表明,ADAMTS16和LAP-TGF-1β存在相互作用。分子生物学的研究表明,过表达WTADAMTS16促进LAP-TGF-β1的激活,但是将ADAMTS16的RRFR基序突变为IIFI（Mut ADAMTS16）,以及在CFs中si RNA干扰ADAMTS16的表达或者TGF-β1中和抗体（TGF-β1 NAb）孵育处理,ADAMTS16对LAP-TGF-β1的激活效应明显受到抑制。由于RRFR基序是ADAMTS16序列中激活CFs中TGF-β1的关键位点,我们假设RRFR四肽小分子模拟了ADAMTS16的功能,并在TGF-β1的激活过程中起到关键作用。体外实验表明,小分子肽RRFR能拮抗ADAMTS16和LAP-TGF-β1之间的相互作用,且与小分子肽RRFR存在浓度依赖性。此外在敲低ADAMTS16表达的CFs中,小分子肽RRFR能促进TGF-β1的激活,表明这种促进作用独立于ADAMTS16本底水平的表达。在TAC诱导的心衰模型中,腹腔注射小分子肽RRFR能激活TGF-β1下游Smad2/Smad3信号通路,同时使心功能障碍和纤维化程度进一步恶化,而这一效应能够被TGF-β1中和抗体治疗所阻断。研究数据表明:（1）ADAMTS16基因是一新的心肌纤维化及心衰进程的影响因子。（2）ADAMTS16的RRFR基序介导了LAP-TGF-β1的激活。（3）小分子肽RRFR通过激活TGF-β1信号通路,在心肌肥厚与心衰的程度过程中发挥关键调节作用。（4）阐明了ADAMTS16/TGF-β1信号通路在心肌纤维化和心衰过程中的重要作用。我们研究发现ADATMTS16在心血管疾病中发挥新的调控作用,并提示ADAMTS16是一个新的治疗心衰及心肌纤维化的靶点,这将为心衰及心肌纤维化的治疗提供新的思路。
覃岚凤[9]（2020）在《复合改性胶原膜及间充质干细胞用于角膜修复的研究》文中进行了进一步梳理角膜是眼睛最外层的透明组织,容易受到损伤而进一步发展成角膜病,角膜病已成为我国的第二大类致盲性角膜疾病。目前,角膜移植术是治疗角膜盲的金标准,然而全世界角膜供体的稀缺是影响手术治疗的最大障碍,且移植术后的免疫排斥问题也不可忽视。因此,迫切需要寻找到角膜再生修复替代材料并解决术后免疫排斥问题。胶原作为天然角膜细胞外基质的主要成分,在角膜再生修复方面应用广泛。然而胶原力学性能差（不耐手术缝合）的缺点限制了其在生物医学领域的应用。纤维素纳米晶具有优异的力学性能和较好的生物相容性,将纤维素纳米晶复合到胶原中可得到具有良好力学性能和生物相容性的胶原基复合材料。间充质干细胞是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,能促进组织修复和抗免疫排斥反应,在再生医学领域受到了极大的关注,在角膜损伤治疗方面也有广泛的研究。因此,本论文拟将复合改性胶原膜及间充质干细胞用于角膜损伤后的再生修复。本研究以牛跟腱I型胶原作为基础材料,通过向胶原溶液中加入不同质量的纤维素纳米晶的水分散液得到不同质量比的胶原基纤维素纳米晶复合膜,其质量比分别为0wt%,1 wt%,3 wt%,5 wt%,7 wt%和10 wt%。对不同质量比的胶原基纤维素纳米晶复合膜进行理化性能和体外细胞实验研究,结果表明:纤维素纳米晶的加入能够有效增强胶原膜的力学强度,与纯胶原膜相比,10 wt%CNCs的拉伸强度和弹性模量分别增加了3.5和2.7倍;且纤维素纳米晶的加入不会对胶原膜本身的溶胀性能和透光性能产生影响,但复合膜的降解速率加快,而7 wt%CNCs与纯胶原膜降解速率相似;体外细胞实验表明,兔角膜上皮细胞和角膜基质细胞在胶原基纤维素纳米晶复合膜上具有良好的粘附形态和细胞增殖,表明胶原基复合膜具有良好的生物相容性;体外细胞划痕实验和TGF-β1诱导下角膜基质细胞向肌成纤维细胞分化实验显示,7 wt%CNCs能显着加快划痕的愈合以及抑制角膜基质细胞向肌成纤维细胞的分化。因此,7 wt%CNCs各方面性能较好,能够满足角膜修复的需要,在角膜再生修复方面具有潜在的应用价值。另外,本研究采用全骨髓贴壁法提取了兔骨髓间充质干细胞,通过体外培养鉴定和共培养研究骨髓间充质干细胞向角膜上皮样细胞的分化以及在TGF-β1诱导下对角膜基质细胞向肌成纤维细胞分化的抑制作用,接下来将移植COL-GA和注射BMSCs用于角膜机械损伤修复的研究,结果表明:本研究提取的细胞经鉴定为BMSCs;与角膜基质细胞共培养的环境中,BMSCs向角膜上皮样细胞分化,而在TGF-β1诱导条件下,与BMSCs共培养的角膜基质细胞向肌成纤维细胞的分化行为被有效抑制;体内动物实验结果表明BMSCs能够在一定程度上抑制角膜基质的纤维化,移植COL-GA能够加快并短时间内维持完全的在上皮化过程,移植COL-GA和注射BMSCs联合使用可一直维持完全再上皮化。综上,本论文基于胶原材料力学性能差以及角膜损伤后基质纤维化的问题,通过引入不同含量的纤维素纳米晶成功制了力学性能较好的胶原基纤维素纳米晶复合膜,研究胶原基纤维素纳米晶复合膜的理化性能和生物学性能,提取并鉴定兔骨髓间充质干细胞,研究骨髓间充质干细胞多向分化和抗纤维化的潜能,最后将戊二醛熏蒸的纯胶原膜与间充质干细胞注射联合用于角膜损伤后的修复,为角膜再生修复研究提供理论参考,对角膜再生修复替代材料和角膜干细胞注射治疗的发展具有重要的参考价值。
熊思佳[10]（2019）在《胶原膜表面图案化及其调控角膜细胞行为的研究》文中进行了进一步梳理生物材料表面拓扑结构可以有效调控细胞的铺展、增殖、迁移和分化等一系列行为,在组织修复过程中发挥着重要作用,目前已引起极大的关注。对于角膜组织工程而言,天然角膜的基底膜表面及基质层中均存在丰富的微纳米拓扑结构,是角膜功能行使的结构基础。因此,将微纳米拓扑结构应用于角膜组织工程支架的构建,研究材料表面微纳米拓扑结构对角膜细胞的调控规律,不仅能加深人们对角膜细胞与其生长的微环境之间相互作用的理解,还对体外构建结构和性能仿生的角膜修复材料,促进角膜组织工程的发展具有重要的理论意义和应用价值。本研究使用胶原作为基底材料,采用软刻蚀与溶液浇注相结合的方法在胶原膜表面精确构建了深度相同,宽度分别为25μm、50μm和100μm的三种微米级沟槽结构,采用扫描电子显微镜、接触角测量仪和紫外-可见分光光度计等方法表征了微沟槽结构对胶原膜理化性能的影响,并通过体外细胞实验研究了其对角膜上皮细胞的形态及行为的调控作用。研究发现,微沟槽结构可使胶原膜的接触角由53°下降至30°40°之间;微沟槽结构还能提高胶原膜的离子渗透性能,沟槽宽度为100μm的胶原膜的离子渗透系数能达到1.3×10-6 cm2/s。细胞实验结果表明,角膜上皮细胞和基质细胞均能在微沟槽胶原膜上实现群体定向排列,取向程度最高可达80%。微沟槽胶原膜可促进上皮细胞的定向迁移,沟槽越窄,定向迁移速度越快。此外,微沟槽结构还能抑制基质细胞向肌成纤维细胞分化,随沟槽宽度增加,抑制效果越显着。本研究还模仿凸点结构在胶原膜表面构建了直径分别为2μm、5μm和10μm有序微点阵结构及其组成的混合微点阵结构,并利用原子力显微镜、接触角测量仪和体外细胞实验等手段研究了微点阵结构对胶原膜理化性能及角膜细胞形态和行为的影响。结果表明,与平滑胶原膜相比,微点阵胶原膜的表面疏水性和表面粗糙度显着增加;微点阵结构还能增加胶原膜的拉伸强度,10μm的微点阵胶原膜的力学强度可达1.8 MPa。细胞实验表明,微点阵结构能显着改变角膜上皮细胞和基质细胞的形态,使细胞形状由椭圆形、长方形和梭形向三角形和星形转变,细胞的面积和圆度降低,长径比增大;直径为10μm的微点阵结构能够诱导上皮细胞定向排列,取向度增加至40%;伴随着细胞的形态变化,微点阵胶原膜上细胞的粘附效率和增殖速率呈现出显着的下降趋势。综上,本研究基于材料表面拓扑结构与细胞相互作用这一基本科学问题,通过微纳加工技术在胶原表面构建了微沟槽和微点阵结构,研究其对胶原膜理化性能以及角膜细胞行为的影响规律,有助于进一步理解材料表面拓扑结构与角膜细胞之间的相互作用,对角膜组织工程支架的设计具有重要的指导意义。
二、CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响（论文提纲范文）
（1）102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 角膜溃疡的病因和愈合机制 |
| 1 角膜溃疡的病因与致病机制 |
| 1.1 角膜溃疡的病因 |
| 1.2 角膜溃疡的致病机制 |
| 2 角膜上皮层伤口的愈合机制 |
| 2.1 生长因子/细胞因子在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.2 Toll样受体2 |
| 2.3 蛋白酶在上皮创面愈合中的作用 |
| 2.4 细胞外基质(ECM)在上皮创面愈合中的作用 |
| 3 角膜基质伤口的愈合机制 |
| 3.1 愈合过程中角膜细胞向成纤维细胞和肌成纤维细胞转化 |
| 3.2 免疫系统细胞在基质修复中的作用 |
| 3.3 创面愈合过程中基质细胞外基质的改建 |
| 3.4 与基质创面愈合过程相关的信号通路 |
| 第二章 治疗角膜溃疡方法的研究进展 |
| 1 药物治疗 |
| 2 角膜工程生物材料 |
| 2.1 胶原蛋白 |
| 2.2 丝素蛋白 |
| 2.3 明胶 |
| 2.4 脱细胞角膜 |
| 2.5 壳聚糖 |
| 2.6 其他合成聚合物水凝胶 |
| 3 手术治疗 |
| 3.1 角膜溃疡清创术 |
| 3.2 结膜瓣遮盖术 |
| 3.3 羊膜移植术 |
| 3.4 穿透角膜移植术 |
| 3.5 板层角膜移植术 |
| 4 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 102例犬角膜溃疡的流行病学调查及细菌分离鉴定与药敏试验 |
| 1 材料 |
| 1.1 临床病例 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 常用试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 细菌的分离和纯化培养 |
| 2.3 MALDI Biotyper系统鉴定细菌和细菌保存 |
| 2.4 药物敏感性试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 病因 |
| 3.2 发病率 |
| 3.3 品种 |
| 3.4 性别和年龄 |
| 3.5 治疗方法 |
| 3.6 治疗效果 |
| 3.7 细菌学分类 |
| 3.8 药物敏感性试验 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 不同治疗方法对犬伪中间葡萄球菌性角膜溃疡的疗效观察 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品和试剂 |
| 1.3 试剂配制 |
| 1.4 仪器和设备 |
| 1.5 手术器械 |
| 2 方法 |
| 2.1 造模前准备 |
| 2.2 麻醉与保定 |
| 2.3 术部消毒 |
| 2.4 角膜溃疡模型建立 |
| 2.5 手术治疗前准备 |
| 2.6 抗生素治疗组 |
| 2.7 抗生素联合手术治疗组 |
| 2.8 术后护理 |
| 3 术后临床常规检查及裂隙灯观察 |
| 3.1 临床检查 |
| 3.2 裂隙灯检查 |
| 3.3 治疗过程中犬泪液量检测 |
| 3.4 犬眼内压测定 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 抗生素治疗组裂隙灯观察的变化 |
| 5.2 手术治疗组裂隙灯观察 |
| 5.3 临床评分 |
| 5.4 泪液量检测结果 |
| 5.5 眼内压检测结果 |
| 5.6 三种治疗方案的疗效 |
| 5.7 三种治疗方案的愈合时间 |
| 6 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 不同治疗方法对角膜溃疡模型犬角膜组织病理学与相关细胞因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验犬术前准备 |
| 2.3 手术采样 |
| 2.4 组织切片制作 |
| 2.5 荧光定量PCR检测相关基因表达量 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 组织病理学观察 |
| 3.1.1 抗生素治疗组组织病理学观察 |
| 3.1.2 抗生素联合手术治疗组病理学切片观察 |
| 3.2 qPCR检测角膜细胞因子的结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 带蒂板层角膜移植术对犬深层角膜溃疡临床病例的疗效观察 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 临床病例介绍 |
| 2 方法 |
| 2.1 术前临床检查 |
| 2.2 手术方法 |
| 2.3 术后护理 |
| 2.4 术后临床检查 |
| 3 结果 |
| 3.1 术前检查结果 |
| 3.2 术后检查结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附录 |
（2）施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 大鼠失神经支配膀胱纤维化模型的建立及CTGF在膀胱纤维化中的作用研究 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用及其机制的研究 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新和不足 |
| 参考文献 |
| 综述 膀胱纤维化发生的分子机制概述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文文章一 |
| 英文文章二 |
（3）CTGF通过诱导FSTL1表达影响哮喘气道重塑机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 明确CTGF及FSTL1在哮喘小鼠气道重塑中的作用 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 细胞水平观察CTGF对FSTL1/DIP2A信号通路的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 体内干预CTGF的表达对于哮喘小鼠FSTL1和气道重塑的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文结论 |
| 结果附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表学术论文 |
| English article |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）结缔组织生长因子抗体在石英粉尘致大鼠肺部纤维化过程中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 第1章 CTGF对石英粉尘致肺部炎症及纤维化程度的影响 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 主要实验仪器 |
| 1.1.2 主要试剂的配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 大鼠的饲养 |
| 1.2.2 石英粉尘的准备 |
| 1.2.3 大鼠的染尘及给药 |
| 1.2.4 大鼠肺组织HE染色及Masson染色 |
| 1.2.5 肺部炎症及纤维化评分 |
| 1.2.6 ELISA检测法 |
| 1.2.7 统计分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 CTGF抗体对石英粉尘诱导大鼠肺组织炎症反应程度的影响 |
| 1.3.2 CTGF抗体对石英粉尘诱导大鼠肺组织纤维化程度的影响 |
| 1.3.3 CTGF抗体对大鼠肺泡灌洗液中炎症细胞因子的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 第2章 CTGF对石英粉尘诱导大鼠肺部上皮间质转化的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠的饲养 |
| 2.2.2 石英粉尘的准备 |
| 2.2.3 大鼠的染尘及给药 |
| 2.2.4 Western Blotting实验 |
| 2.2.5 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 CTGF抗体对上皮间质蛋白标志物E-cadherin表达水平的影响 |
| 2.3.2 CTGF抗体对p120ctn蛋白表达的影响 |
| 2.3.3 CTGF抗体对Rho A蛋白表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 结论 |
| 第4章 结语与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 |
（5）S58通过激活PI3k/Akt/Nrf2信号通路抑制兔青光眼滤过性手术术后纤维化（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 核酸适配子S58靶向TβRⅡ |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 主要实验试剂 |
| 1.1.3 主要实验仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 主要溶液的配制 |
| 1.2.2 细胞培养 |
| 1.2.3 分子对接分析 |
| 1.2.4 免疫荧光实验 |
| 1.2.5 siRNA干扰实验 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 生物信息学分析S58对TβRⅡ的结合作用 |
| 1.3.2 S58通过靶向TβRⅡ减少纤维化 |
| 1.4 讨论 |
| 第二部分 氧化应激在原代结膜囊成纤维细胞纤维化过程中具有重要作用 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 免疫荧光实验 |
| 2.2.3 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) |
| 2.2.4 流式细胞仪实验 |
| 2.2.5 RT-PCR多聚链式酶反应 |
| 2.2.6 划痕实验 |
| 2.2.7 CCK-8实验 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 TGF-β2 激发HConFs细胞内氧化应激反应和增加纤维化水平 |
| 2.3.2 ROS在 TGF-β2 诱导HConFs纤维化中扮演着重要的角色 |
| 2.3.3 S58 促进TGF-β2 诱导的HConFs抗氧化防御能力 |
| 2.4 讨论 |
| 第三部分 S58通过激活PI3k/Akt/Nrf2 信号通路抑制兔青光眼滤过性手术术后纤维化 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 实验对象 |
| 3.1.2 主要实验试剂 |
| 3.1.3 主要实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 制作兔青光眼滤过性手术模型 |
| 3.2.3 病理组织石蜡切片及HE染色 |
| 3.2.4 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 S58 减少TGF-β2 诱导的HConFs纤维化 |
| 3.3.2 S58逆转TGF-β2诱导的HCon Fs纤维化通过激活PI3k/Akt/Nrf2信号 |
| 3.3.3 S58 改善兔青光眼滤过性手术术后滤过泡形态和功能 |
| 3.3.4 S58抑制兔青光眼滤过性手术术后纤维化 |
| 3.4 讨论 |
| 全文结论 |
| 存在的问题及展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 青光眼滤过性手术抗瘢痕治疗最新研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
（6）吡非尼酮通过影响TGF-β1表达抑制兔眼小梁切除术后瘢痕形成的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 兔眼滤过术模型构建及术后应用吡非尼酮眼部毒副作用的观察 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 第二部分 滤过术后吡非尼酮对滤过道中TGF-β1及其相关因子表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 青光眼滤过术后滤过道瘢痕形成机制及抗瘢痕化药物的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩写对照 |
| 攻读学位期间发表的文章 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（7）Yap通过细胞外基质力学正反馈调控成纤维细胞活化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 图表清单及主要符号表 |
| 引言 |
| 1.研究意义 |
| 2.国内外研究现状 |
| 2.1 肾脏固有的成纤维细胞是肾纤维化的主要贡献者之一 |
| 2.2 Yap是细胞内外机械信号的传感器 |
| 2.3 细胞外基质力学和Yap在决定肾间质纤维化的细胞命运中作用 |
| 2.4 CTGF具有促纤维化作用 |
| 3.主要研究内容 |
| 4.研究目标 |
| 第一部分 Yap在小鼠单侧肾脏缺血再灌注损伤模型中的表达 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要实验设备 |
| 1.1.3 主要实验试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 实验讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 Yap对肾成纤维细胞活化和ECM蛋白表达的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验细胞 |
| 2.1.3 主要实验设备 |
| 2.1.4 主要实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 小鼠肾脏原代成纤维细胞分离、纯化和鉴定 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 TGF-β1刺激肾脏成纤维细胞 |
| 2.2.4 药物Verteporfin处理肾脏成纤维细胞 |
| 2.2.5 细胞蛋白提取 |
| 2.2.6 慢病毒过表达载体Yap(5SA)的包装及转染成纤维细胞 |
| 2.2.7 慢病毒敲除基因载体sg-Yap的包装及转染成纤维细胞 |
| 2.2.8 肾原代成纤维细胞免疫荧光双染色鉴定 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 实验讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三部分 细胞外基质刚度对成纤维细胞活化和Yap表达的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验细胞 |
| 3.1.3 主要实验设备 |
| 3.1.4 主要实验试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 实验讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四部分 CTGF对肾成纤维细胞活化和ECM蛋白表达的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 CTGF刺激肾脏成纤维细胞 |
| 4.2.2 慢病毒sg-CTGF转染成纤维细胞 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（8）ADAMTS16通过激活TGF-β1调控心肌纤维化和心功能障碍（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 心衰与心肌纤维化概念 |
| 1.2 细胞外基质的代谢平衡 |
| 1.3 细胞外基质和细胞通讯 |
| 1.4 心肌纤维化相关动物模型 |
| 1.5 CFs在心肌损伤修复中的作用 |
| 1.6 参与心肌损伤修复的MFs的来源 |
| 1.7 心肌纤维化的治疗靶点 |
| 1.8 心肌纤维化的病理生理学 |
| 1.9 TGF-β1在心脏损伤修复中的活化 |
| 1.10 ADAMTS16 与心血管疾病 |
| 1.11 研究意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验相关仪器 |
| 2.2 实验相关软件 |
| 2.3 主要试剂材料与常用溶液 |
| 2.4 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 主动脉弓缩窄手术后,小鼠左心室中ADAMTS16 蛋白和mRNA表达量显着上调 |
| 3.2 Adamts16 mRNA表达量在主动脉弓缩窄后的CFs中显着上调,而在CMs中没有明显变化 |
| 3.3 在TAC小鼠来源的CFs中,Adamts16 mRNA的表达水平与心肌纤维化标志物呈正相关性 |
| 3.4 ADAMTS16 参与CFs细胞的表型转化 |
| 3.5 ADAMTS16与LAP-TGF-β1 的相互作用研究 |
| 3.6 ADAMTS16与LAP-TGF-β1 结合介导LAP-TGF-β1 的激活 |
| 3.7 小分子肽RRFR诱导LAP-TGF-β1 的激活 |
| 3.8 小分子肽RRFR促进TAC小鼠心肌肥厚 |
| 3.9 小分子肽RRFR促进TAC小鼠心肌纤维化 |
| 3.10 TAC手术后小鼠心脏中ADAMTS其他家族成员的变化 |
| 4 讨论 |
| 5 总结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录1 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 附录2 本文所用到的主要英文缩略语 |
（9）复合改性胶原膜及间充质干细胞用于角膜修复的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 角膜组织与角膜病 |
| 1.2.1 角膜的结构与功能 |
| 1.2.2 角膜病 |
| 1.3 角膜损伤修复 |
| 1.3.1 角膜上皮的损伤修复 |
| 1.3.2 角膜基质的损伤修复 |
| 1.4 角膜再生修复替代材料 |
| 1.4.1 羊膜 |
| 1.4.2 角膜脱细胞基质 |
| 1.4.3 胶原 |
| 1.4.4 明胶 |
| 1.4.5 丝蛋白 |
| 1.5 MSCs的概述及其用于角膜损伤修复 |
| 1.5.1 MSCs的来源与特性 |
| 1.5.2 MSCs的培养与鉴定 |
| 1.5.3 MSCs的转分化作用 |
| 1.5.4 MSCs的免疫调节作用 |
| 1.5.5 MSCs的新生血管调节作用 |
| 1.6 本文的研究目的、意义以及内容 |
| 第二章 胶原基纤维素纳米晶复合膜的制备与表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.3 胶原基纤维素纳米晶复合膜的制备 |
| 2.3.1 胶原溶液的制备 |
| 2.3.2 胶原基纤维素纳米晶复合膜的制备 |
| 2.4 胶原基纤维素纳米晶复合膜的理化性能表征 |
| 2.4.1 形貌表征 |
| 2.4.2 粗糙度测定 |
| 2.4.3 溶胀性能测定 |
| 2.4.4 力学性能测定 |
| 2.4.5 透光性测定 |
| 2.4.6 体外降解速率测定 |
| 2.4.7 接触角测定 |
| 2.5 胶原基纤维素纳米晶复合膜的细胞生物学表征 |
| 2.5.1 角膜细胞的培养 |
| 2.5.2 角膜细胞的接种 |
| 2.5.3 角膜细胞的粘附 |
| 2.5.4 角膜细胞的形态 |
| 2.5.5 角膜细胞的增殖 |
| 2.5.6 角膜上皮细胞的体外划痕实验 |
| 2.5.7 角膜基质细胞向肌成纤维细胞分化研究 |
| 2.5.8 数据分析 |
| 2.6 结果与讨论 |
| 2.6.1 胶原基纤维素纳米晶复合膜的形貌 |
| 2.6.2 胶原基纤维素纳米晶复合膜的溶胀性能 |
| 2.6.3 胶原基纤维素纳米晶复合膜的力学性能 |
| 2.6.4 胶原基纤维素纳米晶复合膜的透光性能 |
| 2.6.5 胶原基纤维素纳米晶复合膜的体外降解速率 |
| 2.6.6 胶原基纤维素纳米晶复合膜的亲疏水性 |
| 2.6.7 角膜细胞的粘附 |
| 2.6.8 角膜细胞的形态 |
| 2.6.9 角膜细胞的增殖 |
| 2.6.10 角膜上皮细胞划痕实验 |
| 2.6.11 角膜基质细胞肌成纤维分化 |
| 2.7 本章小结 |
| 第三章 改性胶原膜及BMSCs用于角膜损伤修复的研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与设备 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.3 BMSCs的分离培养鉴定与体外研究 |
| 3.3.1 BMSCs的原代及传代培养 |
| 3.3.2 BMSCs表面抗原的鉴定 |
| 3.3.3 BMSCs体外诱导向成骨细胞和脂肪细胞分化 |
| 3.3.4 BMSCs体外共培养分化为角膜上皮样细胞 |
| 3.3.5 BMSCs体外共培养抑制肌成纤维细胞分化相关因子的分泌 |
| 3.3.6 数据分析 |
| 3.4 胶原基膜联合BMSCs用于角膜损伤修复 |
| 3.4.1 胶原基膜和BMSCs的制备 |
| 3.4.2 实验动物 |
| 3.4.3 角膜板层移植 |
| 3.4.4 裂隙灯观察 |
| 3.4.5 荧光素钠染色 |
| 3.4.6 OCT观察 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 BMSCs的形态观察 |
| 3.5.2 BMSCs表面抗原的鉴定 |
| 3.5.3 BMSCs体外诱导成骨细胞及脂肪细胞的分化 |
| 3.5.4 BMSCs体外共培养分化为角膜上皮样细胞 |
| 3.5.5 BMSCs共培养抑制肌成纤维细胞分化相关因子的分泌 |
| 3.5.6 白光拍照观察 |
| 3.5.7 裂隙灯观察 |
| 3.5.8 上皮化进程观察 |
| 3.5.9 OCT观察 |
| 3.6 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（10）胶原膜表面图案化及其调控角膜细胞行为的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 角膜与角膜组织工程 |
| 1.3 角膜组织工程支架材料 |
| 1.3.1 脱细胞角膜基质 |
| 1.3.2 羊膜 |
| 1.3.3 胶原 |
| 1.3.4 明胶 |
| 1.3.5 丝蛋白 |
| 1.3.6 壳聚糖 |
| 1.3.7 其它人工合成高分子材料 |
| 1.4 表面图案化及其制备方法 |
| 1.4.1 光刻 |
| 1.4.2 软刻蚀 |
| 1.4.3 热压印 |
| 1.4.4 蘸笔纳米刻蚀 |
| 1.5 拓扑结构对角膜细胞的调控作用 |
| 1.5.1 拓扑结构对角膜上皮细胞的调控作用 |
| 1.5.2 拓扑结构对角膜基质细胞的调控作用 |
| 1.5.3 拓扑结构对角膜内皮细胞的调控作用 |
| 1.6 本文的研究目的、意义以及研究内容 |
| 第二章 微沟槽胶原膜的构建及理化性能表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.3 微沟槽胶原膜的制备 |
| 2.3.1 硅片模板的制备 |
| 2.3.2 PDMS模板的制备 |
| 2.3.3 胶原膜的制备 |
| 2.4 微沟槽胶原膜的理化性能表征 |
| 2.4.1 形貌观察 |
| 2.4.2 接触角测定 |
| 2.4.3 溶胀性能测定 |
| 2.4.4 透光性能测定 |
| 2.4.5 离子渗透性能测定 |
| 2.4.6 体外降解速率测定 |
| 2.4.7 力学性能测定 |
| 2.4.8 数据处理、统计与分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 微沟槽胶原膜的形貌 |
| 2.5.2 微沟槽胶原膜的接触角 |
| 2.5.3 微沟槽胶原膜的溶胀性能 |
| 2.5.4 微沟槽胶原膜的透光性能 |
| 2.5.5 微沟槽胶原膜的离子渗透性能 |
| 2.5.6 微沟槽胶原膜的体外降解速率 |
| 2.5.7 微沟槽胶原膜的力学性能 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 微沟槽胶原膜对角膜细胞行为的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与设备 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.3 微沟槽胶原膜的细胞生物学表征 |
| 3.3.1 细胞的培养 |
| 3.3.2 细胞的接种 |
| 3.3.3 接种细胞后胶原膜的形貌观察 |
| 3.3.4 接种细胞后胶原膜的透光性能测定 |
| 3.3.5 细胞的形态及取向观察 |
| 3.3.6 细胞的增殖与粘附 |
| 3.3.7 细胞的迁移 |
| 3.3.8 标志基因的表达水平检测 |
| 3.3.9 标志蛋白的表达水平检测 |
| 3.3.10 数据处理、统计与分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 细胞生长对胶原膜形貌及透光性能的影响 |
| 3.4.2 角膜细胞的取向 |
| 3.4.3 角膜细胞的增殖 |
| 3.4.4 角膜细胞的粘附 |
| 3.4.5 角膜上皮细胞的迁移 |
| 3.4.6 角膜基质细胞的分化 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 微点阵胶原膜对角膜细胞行为的影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 实验材料与试剂 |
| 4.2.2 实验设备 |
| 4.3 微点阵胶原膜的制备 |
| 4.4 微点阵胶原膜的理化性能表征 |
| 4.4.1 形貌观察 |
| 4.4.2 接触角测定 |
| 4.4.3 表面粗糙度测定 |
| 4.4.4 溶胀性能测定 |
| 4.4.5 力学性能测定 |
| 4.5 微点阵胶原膜的细胞生物学表征 |
| 4.5.1 细胞的培养及接种 |
| 4.5.2 细胞的形态及取向观察 |
| 4.5.3 细胞的形态定量分析 |
| 4.5.4 细胞的增殖与粘附 |
| 4.5.5 数据处理、统计与分析 |
| 4.6 结果与讨论 |
| 4.6.1 微点阵胶原膜的形貌 |
| 4.6.2 微点阵胶原膜的粗糙度 |
| 4.6.3 微点阵胶原膜的亲疏水性 |
| 4.6.4 微点阵胶原膜的溶胀性能 |
| 4.6.5 微点阵胶原膜的力学性能 |
| 4.6.6 角膜细胞的形态观察 |
| 4.6.7 角膜细胞的粘附 |
| 4.6.8 角膜细胞的增殖 |
| 4.7 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
四、CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响（论文参考文献）
- [1]102例犬细菌性角膜溃疡的流行病学调查及手术对深层角膜溃疡的疗效观察[D]. 张红超. 扬州大学, 2021
- [2]施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用研究[D]. 刘倩. 山东大学, 2020(04)
- [3]CTGF通过诱导FSTL1表达影响哮喘气道重塑机制的研究[D]. 刘文. 山东大学, 2020(08)
- [4]结缔组织生长因子抗体在石英粉尘致大鼠肺部纤维化过程中的作用[D]. 余其梅. 武汉科技大学, 2020(01)
- [5]S58通过激活PI3k/Akt/Nrf2信号通路抑制兔青光眼滤过性手术术后纤维化[D]. 李雪如. 重庆医科大学, 2020
- [6]吡非尼酮通过影响TGF-β1表达抑制兔眼小梁切除术后瘢痕形成的实验研究[D]. 康欣. 内蒙古医科大学, 2020(03)
- [7]Yap通过细胞外基质力学正反馈调控成纤维细胞活化的研究[D]. 卢松芳. 华南理工大学, 2020(02)
- [8]ADAMTS16通过激活TGF-β1调控心肌纤维化和心功能障碍[D]. 胡长清. 华中科技大学, 2020(01)
- [9]复合改性胶原膜及间充质干细胞用于角膜修复的研究[D]. 覃岚凤. 华南理工大学, 2020
- [10]胶原膜表面图案化及其调控角膜细胞行为的研究[D]. 熊思佳. 华南理工大学, 2019